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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western各个条带间有分界线or点是怎么回事
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liusiapril

木虫 (小有名气)

[求助] western各个条带间有分界线or点是怎么回事

前段时间做western一直没有条带，后经高人指点加大蛋白上样量，就成功的曝出了条带，但是条带之间出现了如小图所示的分界线or点（如小图红色线条标注），身边没有人发生过这种状况，想劳烦见过这种状况或能解释并提出解决办法的同学给予帮助解答，谢谢

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1楼 2013-03-30 17:21:26
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liusiapril

木虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by nicknelson at 2013-04-07 09:10:42
不是TBS，是tris，ph8.8和6.8的...

你是指配胶时的TRIS？我那也是配好了放在那一直用的，没有考虑过它PH变化的问题，我去测测看。
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22楼2013-04-07 10:10:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liusiapril: 金币+1, 感谢一起找原因分析 2013-03-30 23:53:16
可能是封闭不理想或者是膜洗得不是很好。
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2楼2013-03-30 23:46:58
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liusiapril

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-30 23:46:58
可能是封闭不理想或者是膜洗得不是很好。

我觉得封闭的原因可以排除。这次因为某些原因，我室温封闭了4个小时。洗膜也挺彻底的啊，一抗后洗是5×8min，二抗后洗是6×8min。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-03-30 23:51:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

ECL不好了也可能会出现这样的现象。而且这种现象和抗体有关，只是个别抗体偶尔出现这种情况。我觉得你可以检查一下western吸膜的缓冲液pH是不是对，还有就是可以试试封闭过夜。
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4楼2013-03-31 00:10:50
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