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liusiapril

木虫 (小有名气)

[求助] western各个条带间有分界线or点是怎么回事

前段时间做western一直没有条带,后经高人指点加大蛋白上样量,就成功的曝出了条带,但是条带之间出现了如小图所示的分界线or点(如小图红色线条标注),身边没有人发生过这种状况,想劳烦见过这种状况或能解释并提出解决办法的同学给予帮助解答,谢谢

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philoshyren

银虫 (初入文坛)

1.封闭不好
2.一抗浓度大
3.上样量高
4.二抗浓度大
5.发光底物比较敏感,可以用一些国产的效价低一点的
10楼2013-04-02 10:20:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liusiapril: 金币+1, 感谢一起找原因分析 2013-03-30 23:53:16
可能是封闭不理想或者是膜洗得不是很好。
2楼2013-03-30 23:46:58
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liusiapril

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-30 23:46:58
可能是封闭不理想或者是膜洗得不是很好。

我觉得封闭的原因可以排除。这次因为某些原因,我室温封闭了4个小时。洗膜也挺彻底的啊,一抗后洗是5×8min,二抗后洗是6×8min。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-03-30 23:51:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

ECL不好了也可能会出现这样的现象。而且这种现象和抗体有关,只是个别抗体偶尔出现这种情况。我觉得你可以检查一下western吸膜的缓冲液pH是不是对,还有就是可以试试封闭过夜。
4楼2013-03-31 00:10:50
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