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zhangqilinz

新虫 (初入文坛)

[求助] 引物设计

新手,想要扩增一段肽酶基因,用primer5设计的引物加上酶切位点后分数极低,请各位帮忙设计一下,不胜感激
目的基因序列为红色部分 :1 tacaagatct attgacagca atgttacaaa acggaaacgg cactcttaca atcagaaaga       61 aattgccttt tttaagcact tttaccgata ttttggtaaa atttagaatg aattatgcta      121 attaggaggc aaatatatgg cagttaaacg tttctataaa actttccacc cagaacatta      181 cgatttgcgt attaatgtaa accgtaagaa taaaactatt aatggtactt ccacaattac      241 tggtgatgta attgaaaatc cagtatttat taaccaaaaa tttatgacca ttgatagcgt      301 taaggttgat ggtaaaaatg ttgattttga tgtaatcgaa aaagatgaag caatcaaaat      361 taaaacagga gtaactggca aagctgtaat cgaaattgct tatagcgcac cacttactga      421 tactatgatg ggtatttatc cttcatatta cgaattagaa ggtaagaaga agcaaatcat      481 cggtacgcaa ttcgaaacta cttttgctcg ccaagcattc ccatgtgtgg acgaacctga      541 agctaaagct acattctcac ttgctcttaa gtgggatgaa caagatggtg aagttgcact      601 tgctaacatg ccagaagtag aagttgacaa ggatggctac caccactttg aagaaactgt      661 ccgcatgtct agttacttag ttgcctttgc ctttggtgaa ttacaatcta agactactca      721 tactaaggat ggcgtattaa ttggcgttta cgcaactaag gcacacaagc ctaaggaatt      781 agacttcgct ttggacattg ctaagcgcgc aattgaattt tacgaagaat tctaccaaac      841 caaataccca cttccacagt cattgcaact tgcattgcca gacttctcag ctggtgccat      901 ggaaaactgg ggtcttgtaa cttaccgtga agcatacttg ctccttgacc cagacaatac      961 tagcttggaa atgaagaagt tagttgccac agttattacc catgaattgg ctcaccaatg     1021 gttcggtgac ttggtaacca tgaagtggtg ggacaactta tggcttaacg aaagttttgc     1081 caacatgatg gaatacttat cagttgatgg tttggaacct gactggcaca tctgggaaat     1141 gttccaaact agtgaagctg catctgcatt gaacagagat gctactgatg gtgttcaacc     1201 aattcaaatg gaaattaatg acccagcaga tattgactca gtctttgaca gtgccattgt     1261 ttatgctaag ggttcaagaa tgttagtcat ggttcgttca cttcttggtg acgacgcact     1321 tcgcaagggt cttaagtact acttcgacca ccataagttt ggcaatgcca ctggtgatga     1381 cctttgggat gcactttcaa ctgcaactga tcttgatatt ggtaaaatca tgcactcatg     1441 gcttaagcaa cctggttacc cagtagttaa tgccttcgtt gctgaagatg gtcatttgag     1501 gcttacgcaa aagcaattct tcattggtga aggtgaagat aagggtagac aatggcaaat     1561 tccattgaat gctaacttcg acgcacctaa gattatgtct gataaggaaa ttgacttagg     1621 caattacaag gtacttcgcg aagaagcagg tcacccactt agacttaatg ttggcaacaa     1681 ctcacacttc atcgttgaat atgacaagac tttgcttgat gatattttgt cagatgttaa     1741 tgaattggat ccaattgata agttacaatt gcttcaagac ttacgtctct tagcagaagg     1801 caagcaaatt tcttacgctt caattgttcc acttttggtt aaattcgctg attctaagtc     1861 aagcttggta attaacgcac tttacactac tgcagctaag cttcgtcaat tcgttgaacc     1921 agaatcaaat gaagaaaaga acttgaagaa gctttatgat ctcttatcaa aggatcaagt     1981 tgcacgttta ggctgggaag taaagccagg cgaaagcgat gaagatgttc aaattcgtcc     2041 atacgagttg agcgcaagtc tttacgctga aaatgcggac tcaattaagg cagctcacca     2101 aatctttact gaaaatgaag ataacttgga agcattgaat gcagatattc gtccatacgt     2161 tttaatcaat gaagttaaga actttggcaa tgctgaatta gttgataagt taattaagga     2221 ataccaaaga acagctgacc catcatacaa ggttgactta cgcagcgctg taaccagcac     2281 caaggatctt gcagctatca aggctattgt tggcgacttt gaaaatgctg acgtagttaa     2341 gccacaagat ttatgtgatt ggtaccgtgg tttacttgct aaccattatg gtcaacaagc     2401 agcttgggac tggatcagag aagactggga ttggcttgac aagactgttg gtggtgacat     2461 ggaatttgct aaatttatca ctgttactgc aggcgtcttc cataccccag aaagacttaa     2521 ggaattcaag gaattctttg aaccaaagat taatgttcca cttcttagtc gtgaaattaa     2581 gatggacgtt aaggtcatcg aaagcaaggt taacttgatc gaagctgaaa aagatgctgt     2641 taatgatgca gttgctaaag caattgatta agtaatataa agtaataaaa ataaggatct     2701 atctgtaaat aggataggtc cttatttttc gtggtgtaat tgtttttatt gcttacttta     2761 gataagaagg gagtttttct ttgggtaaac gagatt
最后先要加入Xhol 和 Xbal酶切位点,还有组氨酸标签
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zhangqilinz

新虫 (初入文坛)

对不起,我的问题可能不太明确,我总结了一下:
(1)我要做蛋白表达,那设计引物时必须要从起始密码子开始,到终止密码子结束吗?还是可以两端延伸?
(2)需要自己在引物上加起始密码子和终止密码子吗?如何加,在哪加?
(3)我还想要加入一个组氨酸标签,如何选择在哪里加入?
4楼2013-04-08 12:41:00
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biology-boy

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
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2楼2013-03-30 12:37:39
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冰封之real

银虫 (初入文坛)

你说目的基因为红色部分,可哪有红色啊,你给的序列只有一个颜色啊
3楼2013-04-02 13:57:14
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