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zhangqilinz

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
帖子: 3
在线: 22.8小时
虫号: 2020561
注册: 2012-09-22
专业: 微生物遗传育种学

[求助] 引物设计

新手，想要扩增一段肽酶基因，用primer5设计的引物加上酶切位点后分数极低，请各位帮忙设计一下，不胜感激
目的基因序列为红色部分：1 tacaagatct attgacagca atgttacaaa acggaaacgg cactcttaca atcagaaaga 61 aattgccttt tttaagcact tttaccgata ttttggtaaa atttagaatg aattatgcta 121 attaggaggc aaatatatgg cagttaaacg tttctataaa actttccacc cagaacatta 181 cgatttgcgt attaatgtaa accgtaagaa taaaactatt aatggtactt ccacaattac 241 tggtgatgta attgaaaatc cagtatttat taaccaaaaa tttatgacca ttgatagcgt 301 taaggttgat ggtaaaaatg ttgattttga tgtaatcgaa aaagatgaag caatcaaaat 361 taaaacagga gtaactggca aagctgtaat cgaaattgct tatagcgcac cacttactga 421 tactatgatg ggtatttatc cttcatatta cgaattagaa ggtaagaaga agcaaatcat 481 cggtacgcaa ttcgaaacta cttttgctcg ccaagcattc ccatgtgtgg acgaacctga 541 agctaaagct acattctcac ttgctcttaa gtgggatgaa caagatggtg aagttgcact 601 tgctaacatg ccagaagtag aagttgacaa ggatggctac caccactttg aagaaactgt 661 ccgcatgtct agttacttag ttgcctttgc ctttggtgaa ttacaatcta agactactca 721 tactaaggat ggcgtattaa ttggcgttta cgcaactaag gcacacaagc ctaaggaatt 781 agacttcgct ttggacattg ctaagcgcgc aattgaattt tacgaagaat tctaccaaac 841 caaataccca cttccacagt cattgcaact tgcattgcca gacttctcag ctggtgccat 901 ggaaaactgg ggtcttgtaa cttaccgtga agcatacttg ctccttgacc cagacaatac 961 tagcttggaa atgaagaagt tagttgccac agttattacc catgaattgg ctcaccaatg 1021 gttcggtgac ttggtaacca tgaagtggtg ggacaactta tggcttaacg aaagttttgc 1081 caacatgatg gaatacttat cagttgatgg tttggaacct gactggcaca tctgggaaat 1141 gttccaaact agtgaagctg catctgcatt gaacagagat gctactgatg gtgttcaacc 1201 aattcaaatg gaaattaatg acccagcaga tattgactca gtctttgaca gtgccattgt 1261 ttatgctaag ggttcaagaa tgttagtcat ggttcgttca cttcttggtg acgacgcact 1321 tcgcaagggt cttaagtact acttcgacca ccataagttt ggcaatgcca ctggtgatga 1381 cctttgggat gcactttcaa ctgcaactga tcttgatatt ggtaaaatca tgcactcatg 1441 gcttaagcaa cctggttacc cagtagttaa tgccttcgtt gctgaagatg gtcatttgag 1501 gcttacgcaa aagcaattct tcattggtga aggtgaagat aagggtagac aatggcaaat 1561 tccattgaat gctaacttcg acgcacctaa gattatgtct gataaggaaa ttgacttagg 1621 caattacaag gtacttcgcg aagaagcagg tcacccactt agacttaatg ttggcaacaa 1681 ctcacacttc atcgttgaat atgacaagac tttgcttgat gatattttgt cagatgttaa 1741 tgaattggat ccaattgata agttacaatt gcttcaagac ttacgtctct tagcagaagg 1801 caagcaaatt tcttacgctt caattgttcc acttttggtt aaattcgctg attctaagtc 1861 aagcttggta attaacgcac tttacactac tgcagctaag cttcgtcaat tcgttgaacc 1921 agaatcaaat gaagaaaaga acttgaagaa gctttatgat ctcttatcaa aggatcaagt 1981 tgcacgttta ggctgggaag taaagccagg cgaaagcgat gaagatgttc aaattcgtcc 2041 atacgagttg agcgcaagtc tttacgctga aaatgcggac tcaattaagg cagctcacca 2101 aatctttact gaaaatgaag ataacttgga agcattgaat gcagatattc gtccatacgt 2161 tttaatcaat gaagttaaga actttggcaa tgctgaatta gttgataagt taattaagga 2221 ataccaaaga acagctgacc catcatacaa ggttgactta cgcagcgctg taaccagcac 2281 caaggatctt gcagctatca aggctattgt tggcgacttt gaaaatgctg acgtagttaa 2341 gccacaagat ttatgtgatt ggtaccgtgg tttacttgct aaccattatg gtcaacaagc 2401 agcttgggac tggatcagag aagactggga ttggcttgac aagactgttg gtggtgacat 2461 ggaatttgct aaatttatca ctgttactgc aggcgtcttc cataccccag aaagacttaa 2521 ggaattcaag gaattctttg aaccaaagat taatgttcca cttcttagtc gtgaaattaa 2581 gatggacgtt aaggtcatcg aaagcaaggt taacttgatc gaagctgaaa aagatgctgt 2641 taatgatgca gttgctaaag caattgatta agtaatataa agtaataaaa ataaggatct 2701 atctgtaaat aggataggtc cttatttttc gtggtgtaat tgtttttatt gcttacttta 2761 gataagaagg gagtttttct ttgggtaaac gagatt
最后先要加入Xhol 和 Xbal酶切位点，还有组氨酸标签

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