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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助~~~~~PCR产物条带分析
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c_yl

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助~~~~~PCR产物条带分析

我做的是PCR温度梯度，反向引物设计了两个，图片上六个条带两个两个是一组，总共三组，但是疑惑的是第四个条带怎么突然很亮，而且还不知道哪个温度比较适合

79 条件 3.27.jpg
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1楼 2013-03-29 19:07:05
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c_yl

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lily7a26 at 2013-03-29 22:34:58
看溴酚蓝的位置在很上面，说明条带分子量很小，电泳电压低，导致样品弥散，条带我怀疑是引物二聚体，而非目的条带。建议先跑touchdown，确定引物能够跑出来，再慢慢摸索具体的温度。

什么是touchdown？新手，不懂。。。
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7楼2013-03-31 09:53:13
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小科研女dow

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-03-30 03:58:38
其实做实验 目的达到就好
不必要非选出最佳的温度
你可以直接做一个touchdown来P你的条带
检测出结果如果条带很亮就说明你P的浓度高
但是确实也不影响你后续的实验吧
你这个突然很亮的原因我猜测也不一定就是温度低呃影响 毕竟3号不一样
所以可能就是偶然性结果导致的  比如说这管的酶的浓度刚好是下层的没有混匀导致酶多产物浓度高
赞一下 回复此楼
做出色的科研人
2楼2013-03-29 20:13:17
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爱上文慧

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你有没有感觉3、4泳道还有微弱的杂带？是不是退火温度太低了出现的非特异性条带？
分子实验偶然性太大了，郁闷!
赞一下 回复此楼
每一个你讨厌的现在都有一个不努力的曾经
3楼2013-03-29 21:57:31
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
c_yl(gyesang代发): 金币+1, 鼓励帮助楼主分析问题！ 2013-05-01 21:00:57
本帖仅楼主可见
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4楼2013-03-29 22:34:58
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