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c_yl

银虫 (初入文坛)

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[求助] 求助~~~~~PCR产物条带分析

我做的是PCR温度梯度，反向引物设计了两个，图片上六个条带两个两个是一组，总共三组，但是疑惑的是第四个条带怎么突然很亮，而且还不知道哪个温度比较适合

79 条件 3.27.jpg

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1楼 2013-03-29 19:07:05

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Leo_xin

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-05-02 12:03:24

记得点一个marker。。。不然怎么知道你的条带是多大，你就几个产物一点，可能是什么都没P出来，仅仅是引物二聚体。。。而3，4上面两个微弱的条带却是？？？？

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还有太多地方值得改进。

5楼2013-03-30 23:06:36

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小科研女dow

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-03-30 03:58:38

其实做实验目的达到就好
不必要非选出最佳的温度
你可以直接做一个touchdown来P你的条带
检测出结果如果条带很亮就说明你P的浓度高
但是确实也不影响你后续的实验吧
你这个突然很亮的原因我猜测也不一定就是温度低呃影响毕竟3号不一样
所以可能就是偶然性结果导致的比如说这管的酶的浓度刚好是下层的没有混匀导致酶多产物浓度高

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做出色的科研人

2楼2013-03-29 20:13:17

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爱上文慧

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

你有没有感觉3、4泳道还有微弱的杂带？是不是退火温度太低了出现的非特异性条带？
分子实验偶然性太大了，郁闷!

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每一个你讨厌的现在都有一个不努力的曾经

3楼2013-03-29 21:57:31

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匿名

用户注销 (小有名气)

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★
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c_yl(gyesang代发): 金币+1, 鼓励帮助楼主分析问题！ 2013-05-01 21:00:57

本帖仅楼主可见

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4楼2013-03-29 22:34:58

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