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c_yl

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助~~~~~PCR产物条带分析

我做的是PCR温度梯度,反向引物设计了两个,图片上六个条带两个两个是一组,总共三组,但是疑惑的是第四个条带怎么突然很亮,而且还不知道哪个温度比较适合

79 条件 3.27.jpg
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by c_yl at 2013-03-31 09:53:19
什么是touchdown?新手,不懂。。。...

起初退火温度很高,之后每个循环降低一个温度,0.1或者1都行,自己安排。15循环左后就不再降低退火温度,而是改用一定的退火温度接着pcr。
13楼2013-05-02 10:33:08
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小科研女dow

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-03-30 03:58:38
其实做实验 目的达到就好
不必要非选出最佳的温度
你可以直接做一个touchdown来P你的条带
检测出结果如果条带很亮就说明你P的浓度高
但是确实也不影响你后续的实验吧
你这个突然很亮的原因我猜测也不一定就是温度低呃影响 毕竟3号不一样
所以可能就是偶然性结果导致的  比如说这管的酶的浓度刚好是下层的没有混匀导致酶多产物浓度高
做出色的科研人
2楼2013-03-29 20:13:17
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爱上文慧

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你有没有感觉3、4泳道还有微弱的杂带?是不是退火温度太低了出现的非特异性条带?
分子实验偶然性太大了,郁闷!
每一个你讨厌的现在都有一个不努力的曾经
3楼2013-03-29 21:57:31
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匿名

用户注销 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
c_yl(gyesang代发): 金币+1, 鼓励帮助楼主分析问题! 2013-05-01 21:00:57
本帖仅楼主可见
4楼2013-03-29 22:34:58
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