24小时热门版块排行榜    

查看: 3246  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qufuhxd

新虫 (初入文坛)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳跑成这样是什么原因? 已有2人参与

提的乳酸菌16s  原来实验室没人做过,自己第一次摸索着做的,用的27f和1492r的引物25ul体系前十个条带用的dntp(2mM)0.5ul,引物(10uM)各1ul, taq0.5ul 10*buffer2.5ul , 模板0.5ul 水补足25ul。后十个条带是dntp0.5ul   引物各0.2ul,taq0.2ul,buffer2.5ul,模板2ul。pcr条件是94℃5min  94℃30s 56℃30s 72℃1min 30个循环最后72℃10min。由于原来实验室从来没有做个这个的,胶跑成这样不怎么怎么回事啊?求指教!

未命名.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

necilyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看mark,跑胶没问题,后面的几个有拖尾可能是引物有降解或特异性不好,或者是模版有污染,做之前测一下OD260/280的比值,再就是前十个感觉像是引物2聚体,估计还是引物不大行。要是确定引物模版没问题,就换一批试剂再做看看。。
聪明才智要为意外做准备~~
4楼2013-03-26 16:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

euaomte

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个现象叫拖尾,应该是引物不太好,可以换个引物。也可能是样品分解了,导致拖尾现象。具体的再多做几次,看看是不是每一次都这样,如果是操作的原因下次就不会这样了。祝你下次成功!
既然选择了自己的路,即使跪着也要走完.
2楼2013-03-26 09:42:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taoqi1986918

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是pcr扩增不好,不是跑胶的事情
耐得住寂寞才能拥有繁华!
3楼2013-03-26 10:24:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个不是胶的问题,PCR产物不稳定且基本上是杂带,可能是引物设计的有问题,还有就是模板基因组被破坏,建议重新设计引物,重新提取模板基因组。
益学善用
5楼2013-03-27 12:45:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +8 a089 2026-08-07 8/400 2026-08-14 18:46 by beefly
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +22 医学老男孩 2026-08-13 48/2400 2026-08-14 18:33 by wuguocheng
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 大家玩filecode,现在的申请与受理打不开了 +3 dcqxinyang 2026-08-14 6/300 2026-08-14 18:03 by 690092147
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见