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qufuhxd

新虫 (初入文坛)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳跑成这样是什么原因? 已有2人参与

提的乳酸菌16s  原来实验室没人做过,自己第一次摸索着做的,用的27f和1492r的引物25ul体系前十个条带用的dntp(2mM)0.5ul,引物(10uM)各1ul, taq0.5ul 10*buffer2.5ul , 模板0.5ul 水补足25ul。后十个条带是dntp0.5ul   引物各0.2ul,taq0.2ul,buffer2.5ul,模板2ul。pcr条件是94℃5min  94℃30s 56℃30s 72℃1min 30个循环最后72℃10min。由于原来实验室从来没有做个这个的,胶跑成这样不怎么怎么回事啊?求指教!

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taoqi1986918

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是pcr扩增不好,不是跑胶的事情
耐得住寂寞才能拥有繁华!
3楼2013-03-26 10:24:37
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euaomte

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个现象叫拖尾,应该是引物不太好,可以换个引物。也可能是样品分解了,导致拖尾现象。具体的再多做几次,看看是不是每一次都这样,如果是操作的原因下次就不会这样了。祝你下次成功!
既然选择了自己的路,即使跪着也要走完.
2楼2013-03-26 09:42:43
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necilyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看mark,跑胶没问题,后面的几个有拖尾可能是引物有降解或特异性不好,或者是模版有污染,做之前测一下OD260/280的比值,再就是前十个感觉像是引物2聚体,估计还是引物不大行。要是确定引物模版没问题,就换一批试剂再做看看。。
聪明才智要为意外做准备~~
4楼2013-03-26 16:22:49
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个不是胶的问题,PCR产物不稳定且基本上是杂带,可能是引物设计的有问题,还有就是模板基因组被破坏,建议重新设计引物,重新提取模板基因组。
益学善用
5楼2013-03-27 12:45:15
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