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sd3824289

木虫 (正式写手)

[求助] 想请教各位关于pET28a问题！

我想请教一下论坛里的各位，pET28a中有一个T7 Taq，这个是干什么用的，和T7启动子有什么联系或者区别，在序列上T7 taq 是位于T7启动子下游，也想知道一下这个对要表达的目的蛋白有什么影响？谢谢各位！图片见下文！

T7 taq.jpg
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坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
1楼 2013-03-25 16:10:58
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sd3824289

木虫 (正式写手)
那我想请问一下，这个蛋白后面要做纯化和单克隆，T7 Taq对这个影响有多大呢？
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坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
4楼2013-03-25 22:14:00
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niil

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sd3824289: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-03-25 22:13:08
gyesang: 金币+2, 鼓励应助交流！ 2013-03-26 04:10:50
T7 tag 和T7启动子的关系不大。
T7 tag编码了一段氨基酸序列，这段氨基酸序列作为标签，用于融合蛋白的检测和纯化，有特异的抗体识别。
T7启动子则是为了驱动基因表达的。
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Stop fighting,let it flow.
2楼2013-03-25 16:49:57
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无为书生

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sd3824289: 金币+1, ★有帮助 2013-03-25 22:13:18
与前面的His tag是一样的，只是氨基酸序列不一样。
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3楼2013-03-25 20:24:34
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niil

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
sd3824289(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 14:50:40
T7 tag 处于N端的thrombin酶切位点的下游，因此，你的融合蛋白表达出来以后，不能通过thrombin酶切去除。存在这个T7 tag很难说对蛋白的活性有何影响，可能会有影响，也有可能不会影响，那需要通过特异的方式去检测蛋白活性来证明它的影响。
另外它的存在还是有利于表的蛋白的纯化和检测的，当融合蛋白没有N端和C端His tag，则可以利用它来检测和纯化。
估计带T7 tag的蛋白对单克隆抗体的制作也不会有太大影响。
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Stop fighting,let it flow.
5楼2013-03-26 16:04:12
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