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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后单克隆都一样吗
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cdmmore

铜虫 (小有名气)

[交流] 转化后单克隆都一样吗

我构建重组质粒后，转化DH5a，然后挑了一个单克隆提质粒测序，测序结果正确，那么能说明那个平板上的所有单克隆的质粒序列都是正确的吗？谢谢各位啦
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1楼 2013-03-24 21:12:07
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cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-25 05:41:29
不行。每个单克隆都是由一个转化子形成的，所以需要挑单克隆分别鉴定。

谢谢这位大侠！不知道是不是我没说清楚，我说的单克隆是质粒转化E.coli之后，在抗性平板上长出来的，按理说能长就说明含有抗性质粒呀，那么质粒在每一个单克隆里应该都是一样的呀？
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3楼2013-03-25 11:02:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不行。每个单克隆都是由一个转化子形成的，所以需要挑单克隆分别鉴定。
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2楼2013-03-25 05:41:29
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wumeng0

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
cdmmore: 金币+1, 谢谢！ 2013-03-25 13:04:41
gyesang: 金币+2, 鼓励应助交流！ 2013-03-26 04:09:39
如果你转化的是连接产物，那肯定不是每个克隆都一样的。我想你问的应该是构建好经测序鉴定正确的质粒，需要扩增进行的转化，那这时候转化就不需要再进行测序鉴定了，理论上板上的菌落随便挑，每个都是一样的。其实以质粒扩增为目的的转化都没必要图平板，直接摇起来抽质粒就行了。
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红木深衣
4楼2013-03-25 11:45:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by cdmmore at 2013-03-25 11:02:17
谢谢这位大侠！不知道是不是我没说清楚，我说的单克隆是质粒转化E.coli之后，在抗性平板上长出来的，按理说能长就说明含有抗性质粒呀，那么质粒在每一个单克隆里应该都是一样的呀？...

如果已经是鉴定好的质粒，再次转化感受态应该不用再测序了。
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5楼2013-03-26 01:42:03
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