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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后单克隆都一样吗
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cdmmore

铜虫 (小有名气)

[交流] 转化后单克隆都一样吗

我构建重组质粒后，转化DH5a，然后挑了一个单克隆提质粒测序，测序结果正确，那么能说明那个平板上的所有单克隆的质粒序列都是正确的吗？谢谢各位啦
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1楼2013-03-24 21:12:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不行。每个单克隆都是由一个转化子形成的，所以需要挑单克隆分别鉴定。
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2楼2013-03-25 05:41:29
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cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-25 05:41:29
不行。每个单克隆都是由一个转化子形成的，所以需要挑单克隆分别鉴定。

谢谢这位大侠！不知道是不是我没说清楚，我说的单克隆是质粒转化E.coli之后，在抗性平板上长出来的，按理说能长就说明含有抗性质粒呀，那么质粒在每一个单克隆里应该都是一样的呀？
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3楼2013-03-25 11:02:17
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wumeng0

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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cdmmore: 金币+1, 谢谢！ 2013-03-25 13:04:41
gyesang: 金币+2, 鼓励应助交流！ 2013-03-26 04:09:39
如果你转化的是连接产物，那肯定不是每个克隆都一样的。我想你问的应该是构建好经测序鉴定正确的质粒，需要扩增进行的转化，那这时候转化就不需要再进行测序鉴定了，理论上板上的菌落随便挑，每个都是一样的。其实以质粒扩增为目的的转化都没必要图平板，直接摇起来抽质粒就行了。
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红木深衣
4楼2013-03-25 11:45:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by cdmmore at 2013-03-25 11:02:17
谢谢这位大侠！不知道是不是我没说清楚，我说的单克隆是质粒转化E.coli之后，在抗性平板上长出来的，按理说能长就说明含有抗性质粒呀，那么质粒在每一个单克隆里应该都是一样的呀？...

如果已经是鉴定好的质粒，再次转化感受态应该不用再测序了。
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5楼2013-03-26 01:42:03
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mangmanglulu

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把你送出去鉴定正确的菌液弄出来一点放进培养基里直接摇菌不就多了嘛
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6楼2013-03-26 09:21:47
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啊Q精神

木虫 (小有名气)
不一样，有阳性，有假阳性，需要鉴定
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7楼2013-03-26 16:03:24
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cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 啊Q精神 at 2013-03-26 16:03:24
不一样，有阳性，有假阳性，需要鉴定

谢谢啊，这位大侠能说说我这个情况下假阳性指什么吗？
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8楼2013-03-27 10:18:24
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dewey3600

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不一样，如果是连接产物，载体自连的可能还是有的，自连的载体同样带有抗性
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9楼2013-03-27 10:26:48
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cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by dewey3600 at 2013-03-27 10:26:48
不一样，如果是连接产物，载体自连的可能还是有的，自连的载体同样带有抗性

我题目中的意思是用质粒转化的，而不是连接产物转化的，谢谢
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10楼2013-03-27 10:30:07
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dewey3600

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by cdmmore at 2013-03-27 10:30:07
我题目中的意思是用质粒转化的，而不是连接产物转化的，谢谢...

看主楼以为是连接产物转化的，如果是直接质粒转化的话应该基本都是一样的
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11楼2013-03-27 11:18:52
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yonggan55

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
在平板上长出来的单个菌落，每个菌落都是由同一个转化子分裂而来，所以里面的质粒都一样，称为一个单克隆。但平板上有很多个单菌落，各菌落之间的质粒不一定一样。
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12楼2013-03-27 22:49:05
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强子kycg

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不一定  有可能有假阳性的存在
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13楼2013-05-02 17:15:55
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红木深衣

捐助贵宾 (小有名气)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by wumeng0 at 2013-03-25 11:45:37
如果你转化的是连接产物，那肯定不是每个克隆都一样的。我想你问的应该是构建好经测序鉴定正确的质粒，需要扩增进行的转化，那这时候转化就不需要再进行测序鉴定了，理论上板上的菌落随便挑，每个都是一样的。其实以 ...

请问是转化完后直接加培养基摇落吗！如果转化100uldh5，加多少培养基摇菌，摇多久可以提质粒，以及最重要的一个问题，要不要在培养基里加抗生素？感受态细菌说明书是转化后加到大概1ml未加抗生素的培养基摇大概一小时再图板到加了抗生素的固体培养基里生长16个小时。我转化的目的只是扩增验证争取的质粒，应该怎么做啊

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14楼2017-09-12 00:11:35
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