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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 单细胞PCR
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)

[求助] 单细胞PCR

我最近要做单细胞PCR，是用显微操作获取细胞的，吸到倒是没问题，不过有什么方法能够确保细胞打到Trizol里面呢？还有这个RNA提取出来以后怎么样看提取的质量呢？我参考的protocol里面是直接进行反转录和PCR，可能是因为单细胞的RNA太少没法检测质量吧，但是这样如果第一步的RNA都没提到的话后面的不是白做了吗？一点头绪都没有啊，求教有经验的大虫，感激不尽！！
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1楼 2013-03-19 09:57:04
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by kennyhas at 2013-11-22 00:08:50
PCR 管里面确实是很难看到， 96孔板可以很方便观察
我之前做DNA PCR可以做出来...

好的，我试一下。你做DNA是提纯之后再PCR还是直接在裂解液里面P？
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9楼2013-11-22 10:13:02
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aga0110125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也在做这个实验，现阶段是DNA的PCR，都是消化后直接扩增的，没法检测模板的质量，我想问问你看的是哪篇protoco，你的基因组扩增又是怎么做的？
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2楼2013-03-19 14:44:17
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aga0110125 at 2013-03-19 14:44:17
我也在做这个实验，现阶段是DNA的PCR，都是消化后直接扩增的，没法检测模板的质量，我想问问你看的是哪篇protoco，你的基因组扩增又是怎么做的？

Quantitative Estimation of Multiple miRNAs and mRNAs
from a Single Cell
Mugdha V. Joglekar,Chiju Wei,and Anandwardhan A. Hardikar
主要步骤都是按照这个来的。你做出来的结果怎么样呢？提RNA的时候有没有什么特别注意的？我觉得很可能单细胞RNA都提不出来
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3楼2013-03-19 15:53:41
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呼锐

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 炭笔橡皮 at 2013-03-19 15:53:41
Quantitative Estimation of Multiple miRNAs and mRNAs
from a Single Cell
Mugdha V. Joglekar,Chiju Wei,and Anandwardhan A. Hardikar
主要步骤都是按照这个来的。你做出来的结果怎么样呢？提RNA的时候有没 ...

单细胞的现在不是有很多试剂盒可以满足你的实验
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人生就是一个奋斗的过程，只有认真做好每一件小事，才能使成功更近一步！
4楼2013-11-16 21:21:58
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