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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教组氨酸标记切除问题
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zliaoyuan

新虫 (正式写手)

[求助] 请教组氨酸标记切除问题

请教大家一个问题，我用pET28a载体做表达，获得的酶进行酶学性质分析，投稿后一个审稿人说要对表达的酶进行6His切除，因为之前做没有碰到这样的问题，pET28a表达的酶怎么切除呢？我看上面也没有特别的位点啊。请大家帮忙指点一下。
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1楼 2013-03-18 21:05:00
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zliaoyuan

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by imyting at 2013-03-21 22:15:26
pET-28a上有凝血酶酶切位点可以直接切除His标签（如果你的His是在N端的话），一般来说由于His是带碱性的，测酶活什么的都是要切除的。每个杂志都有自己的要求，例如AAC，人家明确指出所有蛋白不能携带任何标签（for ...

恩，谢谢。因为我们是做工业用酶，以前发表的文章包括类似文献重来没有看过做切除的。这次是第一次碰到。杂志没有类似要求，之前杂志接收的文章我看也没有切除。所以在想要怎么弄，如果要切，那所有实验就相当于要重新做了。
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10楼2013-03-24 15:57:59
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zliaoyuan: 金币+5, ★有帮助 2013-03-24 16:04:24
不是很懂，这个6his估计是指第6个氨基酸是组氨酸，可以考虑切在第6个氨基酸以后的位置，具体看你的序列了。
不过做这步之前，最好看点文献，为什么要切。不是所有的审稿人的意见都是对的，只要你有足够的理由，可以推翻的
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2楼2013-03-19 08:26:49
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zliaoyuan

新虫 (正式写手)
他的意思就是6个组氨酸标记可能会影响酶活，我检索了文献，做类似我这个功能的酶人家发表都没有切除，我测活性也没有看到有影响，本来想重做，但没有看到pET系列His标记切除的文献，所以不知道要用什么酶切，我也想过，用文献反驳，问题是这个审稿人也只是说可能会影响，他认为切除后更能真实的反映这个酶的催化活性。所以不知道怎么反驳好。
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3楼2013-03-19 09:03:20
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tjuakasa

木虫 (著名写手)

神木王虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, 非常正确 2013-03-20 08:10:40
一方面引用文献反驳，还有你不是测了酶活吗？没有影响，这不就是最好的反驳意见吗？
没有影响干嘛要切除？或者留着对后续提纯，回收还有用处呢。
这个六组氨酸标签，一般用凝血酶切除，但是也还会残留一两个残基，而且凭空加了一步纯化（凝血酶要去掉）
何必呢？
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如切如磋，如琢如磨
4楼2013-03-19 17:12:10
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