应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » miRNA反转录总是效果很差
151/2返回列表12下一页
查看: 4061  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

machao8405

木虫 (正式写手)

[求助] miRNA反转录总是效果很差

miRNA反转录总是效果很差，加尾法试过10条miRNA只有1个引物凑合能用，茎环法14条miRNA只有3条引物能用，试验做不下去了，谁能有效的帮我设计一下引物啊？我的试验材料是小麦。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-14 17:42:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

这是马甲

至尊木虫 (著名写手)

谁的马甲都不是

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-17 16:38:29
我做的是动物的~~~
我也是用的茎环结构的反转引物，不知道楼主所说的效果很差是什么意思，动物上反转引物的设计有固定的通用序列，再加上几个miRNA特有的碱基即可，我反转了10来个，效果都还不错
赞一下 回复此楼
这是一只什么都不懂的马甲~~~
2楼2013-09-17 09:17:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

machao8405

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 这是马甲 at 2013-09-17 09:17:36
我做的是动物的~~~
我也是用的茎环结构的反转引物，不知道楼主所说的效果很差是什么意思，动物上反转引物的设计有固定的通用序列，再加上几个miRNA特有的碱基即可，我反转了10来个，效果都还不错

试验已经顺利完成了
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-17 20:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Myre-Y0Y0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by machao8405 at 2013-09-17 20:53:45
试验已经顺利完成了...

卤煮咋做的、我用的茎环引物反转录，可是我的目的条带相当不亮啊、microRNA的反转录和其他的反转录有什么区别么？
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-18 08:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Myre-Y0Y0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 这是马甲 at 2013-09-17 09:17:36
我做的是动物的~~~
我也是用的茎环结构的反转引物，不知道楼主所说的效果很差是什么意思，动物上反转引物的设计有固定的通用序列，再加上几个miRNA特有的碱基即可，我反转了10来个，效果都还不错

我的也是动物的、我用的也是茎环引物、可是我的目的条带正常PCR出来就条带很弱、我想知道我的问题出在哪里了、小RNA的反转录和正常的RNA有什么不同么？我的内参却很亮，溶解曲线也很正常。。我快崩溃了。。。
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-18 08:37:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

machao8405

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Myre-Y0Y0 at 2013-09-18 08:37:52
我的也是动物的、我用的也是茎环引物、可是我的目的条带正常PCR出来就条带很弱、我想知道我的问题出在哪里了、小RNA的反转录和正常的RNA有什么不同么？我的内参却很亮，溶解曲线也很正常。。我快崩溃了。。。...

应该是表达量低的缘故吧
赞一下 回复此楼
6楼2013-09-18 08:50:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

machao8405

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Myre-Y0Y0 at 2013-09-18 08:33:30
卤煮咋做的、我用的茎环引物反转录，可是我的目的条带相当不亮啊、microRNA的反转录和其他的反转录有什么区别么？...

普通RNA反转录用的是随机引物，即里面的所有RNA都发转录，颈环法只反转录出来目的小RNA，你的条带不亮可能是表达量本来就低或者本身分子量很小，本来就没法跟大的RNA相比
赞一下 回复此楼
7楼2013-09-18 08:53:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Myre-Y0Y0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by machao8405 at 2013-09-18 08:53:21
普通RNA反转录用的是随机引物，即里面的所有RNA都发转录，颈环法只反转录出来目的小RNA，你的条带不亮可能是表达量本来就低或者本身分子量很小，本来就没法跟大的RNA相比...

那就是说、我的条带不亮是表达量低的原因，结果是正常的么？只要条带是特意条带就可以了嘛？
赞一下 回复此楼
8楼2013-09-18 10:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Myre-Y0Y0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by machao8405 at 2013-09-18 08:53:21
普通RNA反转录用的是随机引物，即里面的所有RNA都发转录，颈环法只反转录出来目的小RNA，你的条带不亮可能是表达量本来就低或者本身分子量很小，本来就没法跟大的RNA相比...

还有就是茎环反转录，你和内参是一起反转录的，还是分开转的？
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-18 10:11:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

machao8405

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Myre-Y0Y0 at 2013-09-18 10:11:49
还有就是茎环反转录，你和内参是一起反转录的，还是分开转的？...

最好一起，如果两个引物互相没影响的话
赞一下 回复此楼
10楼2013-09-18 17:42:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 machao8405 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:52 by o3EMxHUAQDtS
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:40 by o3EMxHUAQDtS
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 4/200 2026-09-01 01:30 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭