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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量如何安排样品
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machao8405

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量如何安排样品

小弟最近在做荧光定量PCR，5个不同处理，12个取样时间，2个器官，还要做内参及重复，如何安排实验才能减小，每板之间对结果的误差？
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1楼 2013-03-12 22:05:52
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hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
machao8405: 金币+2 2013-03-13 18:04:36
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科研是無止盡的
2楼2013-03-12 23:13:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-13 16:39:01
machao8405: 金币+2 2013-03-13 18:04:41
提好的RNA最好同时测浓度后反转录，反转录时要做master mix，这样避免不同时间反转的cDNA造成误差。此外，如果是做相对定量的话，同一样品的目的基因和内参一定要同时跑。如果做绝对定量，板与板之间要做内标。
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3楼2013-03-12 23:54:06
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machao8405

木虫 (正式写手)
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2?: Originally posted by hy_sandra at 2013-03-12 23:13:09
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4楼2013-03-13 08:22:19
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machao8405

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-12 23:54:06
提好的RNA最好同时测浓度后反转录，反转录时要做master mix，这样避免不同时间反转的cDNA造成误差。此外，如果是做相对定量的话，同一样品的目的基因和内参一定要同时跑。如果做绝对定量，板与板之间要做内标。

不同时间点的样品，不在同一板跑影响大不大呢？
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5楼2013-03-13 08:23:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
machao8405: 金币+2 2013-03-13 18:04:53
引用回帖:
5楼: Originally posted by machao8405 at 2013-03-13 08:23:16
不同时间点的样品，不在同一板跑影响大不大呢？...

板与板之间是可能造成一定差别，做相对定量的话问题不大。
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6楼2013-03-13 10:20:03
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hy_sandra

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by machao8405 at 2013-03-13 08:22:19
内参跟目的基因不在一板做应该就失去内参的意义了吧？...

內參是確保樣本之間模版?舛鹊牟町?性，與目的基因沒有關聯，所以我是覺得不在一起作也沒關係。除非你用了tagman primer設計內參，?K與目的基因在同一管內作用，這樣就可以更使loading error減小，誤差就更小了
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科研是無止盡的
7楼2013-03-13 16:28:31
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