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半定量RT-PCR电泳条带越来越浅
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最近被半定量弄得很头疼，希望有高手可以支支招。样本是从小鼠的各个组织中提取的。目前还在摸索管家基因的条件，目的基因头几次都没带就暂时没做了。 具体情况如下：图A是最开始跑的，条带很亮，就是电压过高，条带有点弯曲；图B是图A后一次做的，有两个组织亮度明显较暗，所以也不能用：由于老板怀疑cDNA已经降解，导致条带较暗，所以图C是重新稀释模板做的，但是条带就不如以前亮了；图D是用的另外一批样品做的，浓度最开始有点不一致；图E是调整稀释倍数后做的，亮度差不多了，但是却比之前淡了很多。 电泳缓冲液，dNTP，引物和模板都是新鲜的，条带反而越来越淡，所以我怀疑是制胶的问题。我们用的是EB，老板让胶煮开后就直接加EB，说是 不会有影响。可是EB不是65度以上会挥发吗？现在老板又说不是引物有问题就是我的操作有问题。可是我的操作和之前没有任何变化啊，引物也没有变啊~冤死了 请大家出点主意~  A.jpg  B.jpg  C.jpg  D.jpg  E.jpg |
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4楼2013-03-12 15:40:37
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