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xiangxuanji

新虫 (初入文坛)

[求助] 乳酸菌L.casei的培养

用国外寄过来的固体培养的L.casei进行活化扩大培养,使用的培养基是MRS,文献上说要在培养基中加入5μg/ml的红霉素,于是使用液体MRS过夜培养,不摇动,37℃,再转入固体培养基时发现根本长不起来,试过很多次,液体的培养基不管加或不加抗生素都可以长出来,不过不加抗生素的长的较好,在固体培养集中不管加或不加抗生素都不能长,请问各位虫友问题出现在哪里呢?
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fakeandff

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+2, 鼓励交流 2013-03-06 10:24:01
我不清楚你是怎样转移到固体培养基上的,是划线在表面还是混合培养的,乳酸菌一般是厌氧菌,如果转移到固体上应该是混合培养,长在底部或者悬浮在中层,也可以做夹层培养,目的就是制造一个厌氧的环境。
2楼2013-03-06 09:25:20
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

弱弱地问一句,什么叫混合培养
IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
10楼2013-03-07 20:16:36
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+2, 鼓励交流 2013-03-06 10:24:06
如果只是一株单菌,应该很好培养的
不论用MRS-broth还是MRS-agar,都能很好生长的
你加红霉素的目的不明确啊,一般加抗生素是抑制其它菌的生长,你的是单菌,没必要加的
针对你的问题,你试试在MRS-broth里多传几代,然后在MRS-agar里培养
IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
3楼2013-03-06 09:30:14
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xiangxuanji

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fakeandff at 2013-03-06 09:25:20
我不清楚你是怎样转移到固体培养基上的,是划线在表面还是混合培养的,乳酸菌一般是厌氧菌,如果转移到固体上应该是混合培养,长在底部或者悬浮在中层,也可以做夹层培养,目的就是制造一个厌氧的环境。

用固体培养基时,我划线和混合培养都试过,而且将培养皿用封口膜包紧了也还是没有菌落啊,不知道问题在哪边
4楼2013-03-06 14:24:24
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xiangxuanji

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangxingc at 2013-03-06 09:30:14
如果只是一株单菌,应该很好培养的
不论用MRS-broth还是MRS-agar,都能很好生长的
你加红霉素的目的不明确啊,一般加抗生素是抑制其它菌的生长,你的是单菌,没必要加的
针对你的问题,你试试在MRS-broth里多 ...

我是看到文献上面在培养基中加红霉素的,不知道是不是L.casei菌株中本身含有红霉素抗性基因,因为没有查到,所以就照做了。
我之前有看到你的回复说先用脱脂牛奶培养活化一下,不知道这边是否适用?
新手入门,嘿嘿。。
5楼2013-03-06 14:35:33
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by xiangxuanji at 2013-03-06 14:35:33
我是看到文献上面在培养基中加红霉素的,不知道是不是L.casei菌株中本身含有红霉素抗性基因,因为没有查到,所以就照做了。
我之前有看到你的回复说先用脱脂牛奶培养活化一下,不知道这边是否适用?
新手入门,嘿 ...

不用加这个抗生素的,因为加了对干酪乳杆菌的生长一点作用都没有

如果你是用于活化,用我说的那个方法当然可以的
IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
6楼2013-03-06 15:28:16
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xiangxuanji

新虫 (初入文坛)

内容已删除
7楼2013-03-06 16:00:32
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by xiangxuanji at 2013-03-06 16:00:32
再请问,活化配方是脱脂乳培养基:10%脱脂牛奶+1%酵母粉 ,对不?灭菌条件是什么?
活化之后是直接用接种环接种到液体MRS吗?
另外我的菌种在固体培养基上已经有一个月了,打开盖子是很酸的臭味,不知道是不是坏 ...

对,就是那个配方
灭菌不就是高压锅灭菌吗?121度7min就可以了
正常情况下在冰箱里放一个月应该是没有问题的,发酵发臭的话可能说明这个菌不对了
你没有这个菌的原始菌粉吗,有的话再活化一遍啊
IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
8楼2013-03-07 08:53:29
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xiangxuanji

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhangxingc at 2013-03-07 08:53:29
对,就是那个配方
灭菌不就是高压锅灭菌吗?121度7min就可以了
正常情况下在冰箱里放一个月应该是没有问题的,发酵发臭的话可能说明这个菌不对了
你没有这个菌的原始菌粉吗,有的话再活化一遍啊...

没有菌粉,就是给的固体培养基中培养的菌,那种不需要活化吗?
我昨天试过混合培养,长起来了,太高兴了!不知道是不是乳酸杆菌,再做个革兰氏染色试试。
9楼2013-03-07 09:35:29
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