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nickey910

木虫之王 (职业作家)

[求助] 怎样保证离体大鼠脑组织中ATP不被分解？

各位战友，有谁做过脑缺血再灌注试验，离体脑组织中ATP的液相含量测定，怎样保证离体大鼠脑组织中ATP不被分解，现在我用的样品处理方法是取0.3g脑组织，立即用0.5mol/L高氯酸溶液2ml在冰水浴充分匀浆静置10min，0~4℃以3000rpm离心10min，取上清加入0.5mol/L氢氧化钾调ph为6.5，再以10000rpm离心10min，取上清进样走液相。液相色谱条件为色谱柱Hypersil ODS C18  250mm*4.6mm，柱温40℃，检测波长254nm，流动相A：70mmol/L磷酸二氢钠+3mmol/L四丁基溴化铵（调ph6.5），流动相B：甲醇。A:B=90:10，流速1ml/min。
现在的问题是对照品出峰顺序为AMP 7.3min，ADP  14.4min，ATP  27.2min，分离效果挺好，但是样品中的ADP和ATP检测不出来，基线就是平的，很郁闷，不知是哪里出了问题，是ATP分解了吗，还是别的原因，请帮忙分析一下，非常感谢
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1楼 2013-03-05 14:38:32
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chenyawei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流！ 2013-03-05 20:21:48
nickey910: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-03-12 08:37:13
是不是含量太低了啊，杂质影响也比较大，还有损失，我想做发酵细胞的ATP检测，还在考虑呢，254的波长很多东西都有吸收的
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2楼2013-03-05 19:48:29
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nickey910

木虫之王 (职业作家)
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3楼2013-03-06 09:41:55
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nickey910

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4楼2013-03-08 07:55:47
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nickey910

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5楼2013-03-11 11:18:34
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7楼2013-03-13 13:52:40
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nickey910

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nickey910

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9楼2013-03-18 09:06:17
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