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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

[求助] 有人用NADPH做过实验吗 已有1人参与

我想做一种酶的活性检测,可是这种酶测活性需要NADPH,我购买的是NADPH-Na4,粉末状,具体测活性的话该怎么配置,怎么加呢?购买的NADPH粉末量很少,估计只能溶解后再做实验。有没有做过的,指点一下啊
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lishaohe

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

你是用酶标仪测340nm的OD值变化吗?我们也做过,不过大部分都是直接看底物的生成,直接送HPLC
4楼2013-03-03 18:38:51
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lishaohe

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励发贴交流和应助! 2013-03-17 22:25:27
NADPH是辅酶,终浓度为2-5mM就可以了,我经常做酶活检测,我们都是投反应,测酶活。氧化还原酶都需要这些辅酶,
2楼2013-03-03 17:22:34
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lishaohe at 2013-03-03 17:22:34
NADPH是辅酶,终浓度为2-5mM就可以了,我经常做酶活检测,我们都是投反应,测酶活。氧化还原酶都需要这些辅酶,

你测得是NADPH的减少量吗
3楼2013-03-03 18:12:32
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lishaohe

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★
kabuqinuo89: 金币+2 2013-03-04 10:58:56
如果你加的是NADPH来反应测酶活,OD肯定是变低的,因为NADPH在340nm有吸收峰,而反应后的NADP+没有吸收峰,因而如果酶参加了反应,OD肯定是降低的。通过公式可以计算酶活。
5楼2013-03-03 18:44:00
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