24小时热门版块排行榜    

查看: 4785  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Hopig

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物再次PCR无条带 只有弥散

如图所示,左边是两道marker(DL2000和wide range),前四个样是一次PCR的产物,目的大小是3K,总见不着带。然后就把PCR产物稀释1000倍,进行再次PCR,就出现了大片段的弥散,就是图中后四个样。一开始以为稀释倍数不够,还试过10000倍和100000倍,结果类似,弥散稍微弱一些,但是集中的条带还是很大。求高人指点,这到底为啥啊???如何改进,才能获得清晰的单带啊?

20130227.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hopig

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 潇之天下 at 2013-03-02 12:26:43
您的第一次PCR产物是通过,RT-PCR获得的吗?如果是,电泳检测下RNA的完整性。
左边一次PCR产物特异性太差了,直接弥散了,估计可能是模板RNA或者引物设计的问题。
最好详细说下你的实验过程。希望对你有帮助吧!...

我第一次PCR的模板直接就是DNA。产物大小3k,有小片段的弥散,应该无所谓吧。问题是这样的,之前扩增的产物很好,但就成功了一次,结果送测序还失败了,之后扩增就没有明显的条带了,所以才想二次PCR。
7楼2013-03-02 15:32:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
试试提高退火温度,降低引物浓度,加入DMSO等方法。前两者或者能解决问题。
2楼2013-03-01 12:52:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

潇之天下

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一,检测PCR模板;第二,提高退火温度以增加特异性;第三,梯度稀释,同时设阴性和阳性对照。
修行人
3楼2013-03-01 12:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hopig

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2013-03-01 12:52:56
试试提高退火温度,降低引物浓度,加入DMSO等方法。前两者或者能解决问题。

这就做上试试~谢!
4楼2013-03-01 21:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中南化学337求调剂 +4 niko- 2026-03-19 5/250 2026-03-20 13:49 by 促天成
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +14 陌の森林 2026-03-18 14/700 2026-03-19 22:38 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +12 曦熙兮 2026-03-15 12/600 2026-03-19 19:42 by maocaozhuxi
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +3 葵梓卫队 2026-03-18 5/250 2026-03-19 19:35 by 给你你注意休息
[考研] 0817调剂 +3 没有答案_ 2026-03-14 3/150 2026-03-19 09:51 by Xu de nuo
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 0854可跨调剂,一作一项核心论文五项专利,省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 一志愿西南交大,求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 301求调剂 +9 yy要上岸呀 2026-03-17 9/450 2026-03-18 08:58 by 无际的草原
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
信息提示
请填处理意见