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Hopig

铁虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 1588729
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专业: 基因表达调控与表观遗传学

[求助] PCR产物再次PCR无条带只有弥散

如图所示，左边是两道marker（DL2000和wide range），前四个样是一次PCR的产物，目的大小是3K，总见不着带。然后就把PCR产物稀释1000倍，进行再次PCR，就出现了大片段的弥散，就是图中后四个样。一开始以为稀释倍数不够，还试过10000倍和100000倍，结果类似，弥散稍微弱一些，但是集中的条带还是很大。求高人指点，这到底为啥啊？？？如何改进，才能获得清晰的单带啊？

20130227.jpg

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1楼2013-03-01 12:31:02

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zltj2008

铜虫 (小有名气)

应助: 7 (幼儿园)
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虫号: 363664
注册: 2007-05-07
专业: 生物化学

第一次PCR就弥散。。那你用同样的引物再扩增可不就更弥散。。。
我也同意楼上的建议，先跑个电泳，看看DNA的完整程度。如果DNA没问题的话，那80%就是引物的问题，用一管新的引物或重新涉及引物吧。如果还是要做两次PCR的话，那就最好用巢式PCR。如果不愿意重新设计引物，那也可以考虑用降落PCR增加特异性。