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[求助]
求助，新手关于总RNA提取
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是这样，我要培养肾293细胞，然后用trizol法提取总RNA。 我想问一下，那我在培养细胞的时候所用的离心管，还有tip头之类的也要用DEPC处理么。。还是只有在最后一步就是准备将细胞与trizol混合的时候才用到rnase free仪器？ |
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【答案】应助回帖
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最后一步就可以了，RNA在Trizol提取时才暴露出来，之前都在细胞内，没事的。 提RNA时，注意防止RNAase污染。提RNA所用的东西都要处理，戴手套。 例如从动物组织中提取RNA，需要做的准备工作。 实验材料： 1、 试剂配制 [1]. 0.1%焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarbonate，DEPC）水：1ml DEPC加入900ml双蒸水，定容至1000ml混匀，室温密封保存。 [2]. 无RNase水：0.1% DEPC水，37℃过夜，高压20min，去除DEPC。 [3]. Trizol试剂 [4]. 氯仿：用于提取RNA的氯仿为新包装。 [5]. 异丙醇：用于提取RNA的异丙醇为新包装。 [6]. 75%的乙醇由25ml 0.1% DEPC水与75ml无水乙醇混匀配制而成，4℃保存。 [7]. 5×TBE缓冲液：0.45M Tris-硼酸，0.01 M EDTA。配制：54g Tris，27g 硼酸，20ml 0.5M EDTA (pH8.0)，用无RNase水溶解并定容至1000ml，室温保存，临用时用无RNase水10×稀释。 [8]. 琼脂糖（agarose）： [9]. 6×凝胶载样缓冲液：0.25% 溴芬蓝，0.25%二甲苯青FF，40%（w/v）蔗糖。 2、 器械处理 [1]. 玻璃器皿常规洗净后，在烤箱内180℃干烤10h。 [2]. 所有塑料器材（如Eppendorf管、Tips吸头、PCR薄壁管）均为新购产品，使用前用0.1% 焦碳酸二乙酯DEPC（diethylpyrocarbonate，DEPC）浸泡12h，高压消毒、烘干。 [3]. 研钵处理：0.4N NaOH 浸泡过夜，DEPC水洗涤3遍。 |
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