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zishilanxuan

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[求助] 如何判断合成的基因是否能够在大肠杆菌里表达

我想合成一段目的基因，并且在大肠杆菌里进行表达，我现在想请教给我大神，怎么能够判断是否能够异源表达？

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1楼 2013-02-27 10:37:14

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tianyinghu

金虫 (小有名气)

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加个标签不就可以了吗，如His，flag,等。

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2楼2013-02-27 10:51:44

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zishilanxuan

金虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by tianyinghu at 2013-02-27 10:51:44
加个标签不就可以了吗，如His，flag,等。

主要是合成目的基因太贵了，想一下看出来能不能表达

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3楼2013-02-27 12:02:23

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cicelyzh

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主要看你做表达的目的是什么。具体情况具体分析。如果你想表达产物具有生物活性，而且目的基因产物需要复杂的修饰才有活性，一般不适合在大肠杆菌里表达。甚至酵母这样的简单真核生物也不尽人意。反之，应该可以做异源表达。

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4楼2013-02-27 13:41:21

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lidonghong

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感谢参与，应助指数 +1

把目的基因连接到表达载体上并在大肠杆菌中诱导表达，并有抗体砸一下，就可知道是否表达

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生物化学与分子生物学

5楼2013-02-27 14:44:50

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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

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如果你要合成的基因是细菌的，在e.coli中一般都能表达出来的。不过也可以把你的基因在ncbi中比对一下，看一下同源性较高的基因能不能在e.coli中表达，应该也可以尝试一下！

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6楼2013-02-28 08:42:37

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zishilanxuan

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6楼: Originally posted by xl0071334 at 2013-02-28 08:42:37
如果你要合成的基因是细菌的，在e.coli中一般都能表达出来的。不过也可以把你的基因在ncbi中比对一下，看一下同源性较高的基因能不能在e.coli中表达，应该也可以尝试一下！

谢谢指点！

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7楼2013-03-01 07:51:24

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gaojuan1985

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如果是别人做过的基因，看别人发表的文献里面是怎么样的情况，载体、宿主菌、表达情况等。
如果是别人没有做过的，新的基因，那还真不好说。我们实验室做的基因，有一些全基因合成的，真不表达，一点都不表达。但这是跟基因自身的组成和结构有关的，我们那个基因重复序列很多，推测可能会有同源重组以及RNA复杂的高级结构。所以可以用软件分析一下你的目的基因，看看有没有这些状况。

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8楼2013-03-01 08:43:47

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zishilanxuan

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8楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-01 08:43:47
如果是别人做过的基因，看别人发表的文献里面是怎么样的情况，载体、宿主菌、表达情况等。
如果是别人没有做过的，新的基因，那还真不好说。我们实验室做的基因，有一些全基因合成的，真不表达，一点都不表达。但这 ...

那你的基因大概多长，我的将近2000bp

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9楼2013-03-01 20:31:10

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gaojuan1985

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我的1800bp，我的重复序列很多，不表达其实在预期当中。这跟基因长短关系不大，跟基因的复杂程度有关吧。

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10楼2013-03-01 20:47:55

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