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shiliyusly

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[交流] QPCR扩增效率太低

大家好，我做QPCR基因扩增效率的时候，一个基因由于CT太大，所以只进行4个2倍的稀释度，二步法退火温度是61度扩增效率不高只有78%（图1）溶解曲线（图3），所以我做了三步法退火温度59度扩增效率反而更低了只有57%（图2）溶解曲线（图4），很奇怪，请教下大家看这是什么原因，该怎么改进呢？有看到资料说把引物浓度提高，不知道效果怎样。

图1.jpg

图2.jpg

图3.jpg

图4.jpg

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1楼 2013-02-26 23:05:23

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cicelyzh

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-02-28 10:37:58

引用回帖:

9楼: Originally posted by shiliyusly at 2013-02-28 07:45:44
你说的第一种方法，可不可以这样理解如果丰度低的引物用2倍的模板，内标不变，他们的CT值都在20-30，计算相对表达的时候，将丰度低的基因的CT值减半后再与内标基因进行计算呢？...

模板浓度2倍，CT值为原模板浓度的CT-1。所以把2倍浓度的样品的CT+1就可以了。这种做法用于微调。我说的第二种做法是因为丰度实在相差非常多，第一种做法也很难达到预期效果时用的。