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9号逐梦客

新虫 (正式写手)

[求助] 分子克隆

大家好，请教问题，就是我做分子克隆，我从质粒上扩增需要的片段下来，我跑胶看了，大小是正确的，然后我纯化之后我也去跑了胶，大小是对的，然后做酶切，酶切完之后去跑胶，就不见条带了，不知道是不是自己胶的原因还是怎么回事？请大家帮忙分析一下。非常感谢。
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为了梦想不断坚持在路上
1楼 2013-02-26 22:25:54
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erahua

铁虫 (初入文坛)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励应助 2013-03-14 00:25:18
1、首先是不是胶的问题，应该可以看marker的。
2、酶切总量不会太高，然后需要一定的反应体积。可以算下你电泳的量是多少。好像一二十ng就可以在紫外下看到了。如果分子量太小，不要跑太久。
3、看下酶有没有问题吧。很多时候酶会出问题。
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2楼2013-02-27 05:24:52
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
9号逐梦客: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-02-27 14:30:49
1.看看你的片段有没有2个及以上的酶切位点  
2.可以先不用酶切直接测序，结果和你预期一致在酶切鉴定也可以
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3楼2013-02-27 08:48:11
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shizy1988

捐助贵宾 (初入文坛)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流和应助 2013-03-14 00:25:32
1.是你酶切后预计的大小是多少，太小的话可能因为量不足而不能显色。
2.你有什么染料染的，是不是没有加loading buffer
3.你用了多少量去做酶切，然后点了多少样品，是不是样品不够显色的。
4.就是胶回收试剂盒每次都有损失，有没有测浓度
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4楼2013-03-13 20:58:30
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xyoung88

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

很可能是量太少，你跑那么多次胶干吗？以前是搞有机的？
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5楼2013-03-14 02:19:16
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