| 查看: 1055 | 回复: 4 | |||
gaojuan1985新虫 (正式写手)
|
[求助]
关于细菌基因文库的建立及酶的筛选，新手，请各位指教！
|
|
大家好！ 我手头有一个细菌，是从土壤中筛选出来的，能分泌我所需要的酶。该细菌我进行了16S rDNA测序，发现目前还没有它的全基因组序列。但是我想得到我的酶的基因信息，因此想通过基因文库的方法。但是本人新手，看了一些资料，有很多问题不明，特此请教： 1：基因组DNA的处理：有的用Sau 3AI进行部分酶切，有的用物理方法进行断裂，还有其它限制性内切酶处理等。我根据经验推测我的目的基因ORF大概在2 kb左右，因此，我该把基因组DNA切到多大比较合适？各位可否给个protocol？切多久？酶量？等等 2：载体的选择：目前手头只有质粒，所以想先尝试一下质粒，fosmid和cosmid往后排，呵呵。那么质粒该选用哪种？我看有用pUC18的，也有用pET系列的。各有何优缺点呢？ 3：重组克隆的计数：弱弱地问一下，1万个克隆的话，怎么计算出来的？难道一个一个数出来的？还有，怎么保存这些重组克隆呢？ 问题较多，请多赐教。金币有限，但是与大家交流沟通的心无限，呵呵，谢谢啦  |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有215人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 96孔板的选择 用于筛选用细菌构建的基因文库
已经有5人回复
- 大家都是用什么方法提细菌基因组呢（文库用）
已经有26人回复
- 小片段基因文库构建中载体的选择
已经有15人回复
- 怎么在细菌中找产酶相关的基因
已经有6人回复
- 细菌基因组文库构建的相关问题
已经有23人回复
- 细菌基因组的部分酶切
已经有16人回复
- EcoRI 酶切细菌基因组切不开
已经有19人回复
- 【求助/交流】细菌基因组的单酶切问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】如何构建细菌的基因组表达文库
已经有19人回复
- 【求助/交流】关于细菌 抗性 筛选 质粒基因 进入染色体基因组
已经有4人回复
- 【求助/交流】有从落叶筛选产纤维素酶细菌的虫友吗
已经有8人回复
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2013-02-26 22:06:42
gaojuan1985
新虫 (正式写手)
- 应助: 57 (初中生)
- 金币: 75.5
- 散金: 839
- 红花: 8
- 帖子: 561
- 在线: 119.6小时
- 虫号: 1374933
- 注册: 2011-08-21
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
3楼2013-02-27 11:11:45
4楼2013-03-01 00:09:33
gaojuan1985
新虫 (正式写手)
- 应助: 57 (初中生)
- 金币: 75.5
- 散金: 839
- 红花: 8
- 帖子: 561
- 在线: 119.6小时
- 虫号: 1374933
- 注册: 2011-08-21
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
5楼2013-03-01 13:27:03
20