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XXH_QB

木虫 (正式写手)

[交流] LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kits测定E.coli浓度 已有9人参与

如题,实验需要用LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kits测定E.coli浓度,文献上说的是先染色,再The stained bacteria were imaged with an epifluorescence microscope (Olympus) with a U-filter (364 nm) for imaging cells stained with both PI and DAPI and an IB filter (464 nm) for detecting cells stained with only PI。
请问染色后,定量部分具体如何操作,需要什么仪器呢?
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kku6666

金虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by rzhdw at 2014-01-19 12:04:24
请问黑色膜是什么东西?能不能给详细说下,或者有文献给几篇,我邮箱hongwei053@126.com 因为我最近做live/dead,用的是普通玻璃载玻片跟盖玻片压片,想要在荧光显微镜下拍照,但是菌液好像一直在流动,没办法拍到 ...

我也是用普通玻璃载玻片跟盖玻片压片,在共聚焦下观察,有时可以看到细菌在动,DIC图和荧光图有时会不匹配,放封片剂少的时候好像能好一点。跟你遇到的问题差不多,你怎么解决的?求给详细说下,或发几篇文献,我邮箱kku6666@163.com,万分感谢,这个问题已经好久没解决了
17楼2015-04-12 16:30:06
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhangxingc: 金币+5, 鼓励有价值回帖,奖励一下 2013-02-25 09:09:48
使细菌尽量均匀分布于黑色膜上,黑色膜一般使用25mm的好像,

显微镜下的视野面积可以从物镜的型号得知,

数显微镜视野下的菌数,变化视野,再数,至少数10个视野以上,取平均值,

然后通过一个系数换算出膜上的细菌数。

这样数有一定的风险,就是细菌在膜上分布不均匀,尽量数很多视野,视野遍布黑色膜的各个部分。

这种方法在很多文献上可以查到。
环境卫生、微生物学、卫生应急
2楼2013-02-25 08:53:10
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

几年前做过,等我回国后还要做这个实验
环境卫生、微生物学、卫生应急
3楼2013-02-25 08:53:58
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XXH_QB

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mizhoulong at 2013-02-25 08:53:10
使细菌尽量均匀分布于黑色膜上,黑色膜一般使用25mm的好像,

显微镜下的视野面积可以从物镜的型号得知,

数显微镜视野下的菌数,变化视野,再数,至少数10个视野以上,取平均值,

然后通过一个系数换算出膜 ...

回答我的还是前辈啊感动~~
我需要测试两种情况下的大肠杆菌浓度:1、溶液里的E.coli浓度;2、薄膜上截留的E.coli浓度
今天上午咨询了试剂公司技术部门,他们说染色后能用荧光显微镜下照相并计数,两种情况都行(文献是这么做的,具体详细的没提到);可是打电话给学院负责荧光显微镜的老师,他却说只能用透光的玻片来做。
    前辈说的黑色膜透光吗?哪里可以买到呢?
4楼2013-02-25 12:13:00
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