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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助20%PAGE胶的配方
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yang003213

木虫 (小有名气)

[求助] 求助20%PAGE胶的配方

我用的是SDS-PAGE凝胶配制试剂盒，说明书上最大只有15%胶所需各成分的体积，现在我想知道配制20%PAGE胶所需各成分体积。
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1楼 2013-02-21 15:01:28
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童童-123

新虫 (初入文坛)
请问找到方法了吗？能不能分享一下呢，刚开始接触，什么都不懂，拜托啦
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5楼2016-04-11 19:56:27
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yang003213: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-02-21 16:45:05
说明书上应该有10%胶的各组分和体积吧，将30%丙烯酰胺混合液体积加倍，去离子水的体积相应的减掉多加的丙烯酰胺的体积，其他试剂用量不变。
如：用30%的丙烯酰胺母液配制10ml10%的SDS-PAGE胶，需要30%的丙烯酰胺混合液3.3ml、水4.0ml。配20%的SDS-PAGE胶需要丙烯酰胺6.7ml，水0.6ml。
不知道我说明白了没有。
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2楼2013-02-21 15:59:21
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yang003213

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yesali at 2013-02-21 15:59:21
说明书上应该有10%胶的各组分和体积吧，将30%丙烯酰胺混合液体积加倍，去离子水的体积相应的减掉多加的丙烯酰胺的体积，其他试剂用量不变。
如：用30%的丙烯酰胺母液配制10ml10%的SDS-PAGE胶，需要30%的丙烯酰胺混 ...

说明书上10mL10%胶的配方是
蒸馏水：      2.7mL
30%Acr-Bis:    3.3mL
1M Tris,pH8.8: 3.8mL
10%SDS：    0.05mL
10%过硫酸铵：0.05mL
TEMED：      0.002mL
我怎么算都不对
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3楼2013-02-21 16:35:28
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genda_cto

新虫 (初入文坛)
这种情况我觉得你唯有牺牲一下缓冲体系了。
方案1，
30%Acr-Bis:    6.6mL
1M Tris,pH8.8: 3.2mL
10%SDS：    0.05mL
10%过硫酸铵：0.05mL
TEMED：      0.002mL
方案2，先自行配制1.1875M Tris,pH8.8
30%Acr-Bis:    6.6mL
1.1875M Tris,pH8.8: 3.2mL
10%SDS：    0.05mL
10%过硫酸铵：0.05mL
TEMED：      0.002mL
如果不凝，则10%APS用0.1mL,TEMED用0.01mL.
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4楼2013-02-22 09:03:45
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