24小时热门版块排行榜    

查看: 1012  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

康葱头

新虫 (正式写手)

[求助] 克隆片段不是目的片段

根据已有的全基因组序列,想克隆一个片段,设计引物,目的片段大小为2500bp,结果P出来的只有1500-2000bp。我就想先克隆测序看下,到底是怎么回事,会不会是片段太大,断了。结果测出来的结果为1700bp左右大小,而且和原片段相似性只有35%左右,但是在克隆测序的片段里又能找到我所设计的引物,这是怎么回事?请各位大侠指教!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

康葱头

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-02 12:06:34
克隆基因属于多基因家族吗?既然有基因组全序列,引物设计后是否做了blast?

没有,是一个基因的上游序列(启动子序列);因为我不是做生物信息学的,我只会用小片段的比对,全基因组的blast没做
7楼2013-02-02 17:40:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

康葱头

新虫 (正式写手)

将测序得到的序列结果去NCBI里BLAST,只有35BP的片段与一些序列有97%的同源性,其它序列都搜不到相似性高的同源性序列,这是为什么?
2楼2013-02-01 23:05:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物特异性决定扩增产物
说明引物设计的错误引发太高,特异性不好
重新设计引物就可以了
3楼2013-02-01 23:11:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
康葱头: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-02-02 17:41:29
I agree with the above. On one hand, your primer may be not specific. On the other hand, you may change your pcr condiction, the fragment you now got might caused by non-specific amplifying.
immunologyparasite
4楼2013-02-02 10:42:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 21/1050 2026-08-31 18:04 by 异氰酸酯
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见