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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因敲除中maker的方向，求討論
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daniel_tang

金虫 (小有名气)

[交流] 基因敲除中maker的方向，求討論

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Datsenko, K.A. & Wanner, B.L. One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products. Proceedings of the National Academy of Sciences 97, 6640-6645 (2000).

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1楼 2013-01-31 16:14:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by daniel_tang at 2013-02-01 13:13:13
“反方向插入可能造成互补链DNA的表达”

這個觀點很有說服力，想問下有人研究過這個嗎？有沒有paper討論marker的方向的？...

不知道有没有人研究过，不过投稿的时候如果插的方向反了有些reviewer会提出质疑。我觉得主要是这个原因，为了减少可能出现的麻烦，所以总是正向插入的。
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10楼2013-02-02 12:59:04
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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daniel_tang: 金币+2 2013-02-01 10:42:12
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-02-01 10:54:27
敲除基因时侯， 根据operon，有时候是连着promoter一起敲掉的
marker自带constitutive promoter 不需要考虑方向。
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2楼2013-02-01 02:38:20
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sumoeric

金虫 (小有名气)
★ ★
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daniel_tang: 金币+1 2013-02-01 13:00:33
引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-02-01 02:38:20
敲除基因时侯， 根据operon，有时候是连着promoter一起敲掉的
marker自带constitutive promoter 不需要考虑方向。

顶一下楼上，我也是做这方面的，之前也挺烦的，其实就像楼上说的同启动子有关，只要有启动子就不用考虑方向
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3楼2013-02-01 07:50:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
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daniel_tang: 金币+3 2013-02-01 13:00:51
一般是需要筛选基因与敲除基因方向一致，否则，由于筛选基因自身有启动子，反方向插入可能造成互补链DNA的表达。
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4楼2013-02-01 07:57:28
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