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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮忙看看这个载体图谱吧
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xy656691

金虫 (正式写手)

[求助] 帮忙看看这个载体图谱吧

这个图谱中GST标签式用的乳糖的诱导型启动子吗？如果我在CMS区加入我的目的基因，将来用来提取蛋白，那么我要加入的目的基因是cDNA还是cDS序列呢？

pEX-2TK-GST.JPG
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1楼 2013-01-26 11:28:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-26 17:04:55
看不到图，不知道载体上的启动子情况。cDNA包括了5'UTR和3'UTR，做表达时你要插入的基因序列是coding sequence, 即CDS。
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xy656691
2楼2013-01-26 12:20:46
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-26 17:05:01
你这个图貌似应该叫pGEX-2KT吧，我这里有可能是你的质粒图谱
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5455669
把附件4下载下来，找pGEX-2KT看看是不是你的质粒
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学习中
3楼2013-01-26 14:30:59
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xy656691

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-26 12:20:46
看不到图，不知道载体上的启动子情况。cDNA包括了5'UTR和3'UTR，做表达时你要插入的基因序列是coding sequence, 即CDS。

那如果我知道了cDNA序列如何知道CDS序列呢？
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4楼2013-01-26 16:20:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xy656691: 金币+5, 谢谢 2013-01-27 10:10:42
引用回帖:
4楼: Originally posted by xy656691 at 2013-01-26 16:20:58
那如果我知道了cDNA序列如何知道CDS序列呢？...

从cDNA序列上找所有的ORF，很多软件都可以做的。其实就是找起始密码子（一般是ATG）到终止密码子（一般是TAA）之间的序列。
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xy656691
5楼2013-01-27 03:41:35
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xy656691

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-27 03:41:35
从cDNA序列上找所有的ORF，很多软件都可以做的。其实就是找起始密码子（一般是ATG）到终止密码子（一般是TAA）之间的序列。...

你的意思是说，cds是CDNA中的ORF区域吗？那么把这些ORF区域组合到一块就是这个基因的CDS序列了吗？那么组合的时候要不要把每段ORF的启动密码子和终止密码子去掉呢？
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6楼2013-01-27 10:14:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by xy656691 at 2013-01-27 10:14:13
你的意思是说，cds是CDNA中的ORF区域吗？那么把这些ORF区域组合到一块就是这个基因的CDS序列了吗？那么组合的时候要不要把每段ORF的启动密码子和终止密码子去掉呢？...

你要表达的是一个基因吧，这个基因的CDS就是ORF，以cDNA为模板，把包括起始密码子到终止密码子的所有碱基序列P出来克隆到表达载体就可以了。就是去掉cDNA序列中的非翻译区。
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xy656691
7楼2013-01-27 12:19:57
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xy656691

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-27 12:19:57
你要表达的是一个基因吧，这个基因的CDS就是ORF，以cDNA为模板，把包括起始密码子到终止密码子的所有碱基序列P出来克隆到表达载体就可以了。就是去掉cDNA序列中的非翻译区。...

谢谢，那如果我拿到一个基因的CDNA序列，只需要在这里面找到起始密码子和终止密码子，这之间的碱基序列就是CDS了？有没有什么软件能做这个的？
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8楼2013-01-27 12:54:45
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xy656691: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-27 13:48:11
引用回帖:
8楼: Originally posted by xy656691 at 2013-01-27 12:54:45
谢谢，那如果我拿到一个基因的CDNA序列，只需要在这里面找到起始密码子和终止密码子，这之间的碱基序列就是CDS了？有没有什么软件能做这个的？...

能做这类分析的软件很多，我做克隆方面的分析一直都用Vector NTI。
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9楼2013-01-27 13:47:12
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