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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 同一平板的单菌落摇菌后提取质粒跑胶不一样大
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] 同一平板的单菌落摇菌后提取质粒跑胶不一样大

目的基因与表达载体连接后转化，同一平板的单菌落摇菌后提取质粒跑胶不一样大，这是为什么？
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1楼 2013-01-24 22:57:45
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
我除了提质粒双酶切验证，还要做菌液PCR验证吗？是取菌液作为模板进行PCR吗？
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2楼2013-01-24 23:01:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接转化板上的不同菌落当然有可能提出不同的质粒，所以需要筛选鉴定呀。一般是先用菌落PCR初步验证，选阳性克隆小提质粒做酶切鉴定。选取几个酶切鉴定正确的克隆送去测序。序列正确的话就可以去做表达实验了。
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3楼2013-01-25 08:01:30
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这些方法的出发点是以省工时为主。如果你能确定没有问题的话，什么都不做也可。但是如果你错了，就得从头来。
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shine
4楼2013-01-25 09:04:32
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用菌液或质粒做模板都可以，用你的引物和通用引物同时来做，加阴阳对照加MARKER，确定哪个是正确的克隆即可。
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5楼2013-01-25 10:47:52
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌落PCR也很快很方便啊，你可以保留那个菌液，在PCR结果出来之后，就可以直接有种子可以活化，进行下一步的表达了！
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6楼2013-01-26 10:42:35
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