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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Trizol 法 RNA提取失败 请虫友帮忙分析下 什么原因?该怎么办吖
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cai3110274

木虫 (职业作家)

[求助] Trizol 法 RNA提取失败 请虫友帮忙分析下 什么原因?该怎么办吖

A260/A280=2.05   A260/A230=2.3   浓度1000ng/μL
电泳跑出来怎么会这样呢  ？
还有一个情况是 我的Trizol试剂是红色的  加氯仿  离心分 三层取上清的 时候  我的上层怎么还是红色的呢  没有无色 有没有知道的 帮忙指点一下 非常着急！ 感谢！
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夫天地者万物之逆旅
1楼2013-01-17 10:49:40
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cai3110274: 金币+3, ★★★很有帮助, 确实用的了蛮久了 不过还可以用 呵呵 2013-01-19 20:23:52
不是你的水饱和酚有问题就是氯仿有问题
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10楼2013-01-19 01:51:12
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cai3110274

木虫 (职业作家)
RNA 电泳图

10000652649544.jpg
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夫天地者万物之逆旅
2楼2013-01-17 10:56:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cai3110274: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-01-17 17:36:48
胶放反了。下面那些亮的是RNA，5S分开成条带，两条大的没分开。上样量是不是有些大了。点样孔有些亮，说明有蛋白核酸复合体。
trizol加入氯仿抽提离心后应该在下面的有机相里。这一步混合一定要充分，使氯仿充分萃取trizol试剂里的有机成分。你说的上面水相还是红的有可能是氯仿萃取不充分。一般在材料使用较多时水相会有一点颜色，那是材料萝莉的水溶性色素。如果你的材料不是含有大量水溶性红色素而水相颜色很红的话，那是有问题。一个是注意氯仿抽提充分，另一个可能是氯仿加的体积不对。
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3楼2013-01-17 12:01:26
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淘气肥猫

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cai3110274: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-01-17 17:42:34
5S的带有点太亮了，可能有些降解。还有你的Trizol加的可能不够多，不能完全裂解样品，所以水相里的颜色来自未被充分裂解的样品，可能是血啊或者花青素啊什么的。还有再确定一下你的trizol和氯仿质量没问题吧
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4楼2013-01-17 13:35:42
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