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质粒快抽有条带,提取时却没有了,什么问题啊?
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piaoyunokok
木虫
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质粒快抽有条带,提取时却没有了,什么问题啊?
如题,最近试验转化大肠杆菌E.Coli DH5α,氨苄抗性,做质粒快抽时有条带,而且条带还很亮的,可是扩培(加入抗生素)后,却提不出质粒来,半点条带都没有,请教各位高手到底是什么原因?????
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1楼
2013-01-16 16:39:50
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piaoyunokok
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3楼
:
Originally posted by
cicelyzh
at 2013-01-17 08:53:00
能确定快抽时的条带是目的质粒吗?快抽时看到的亮的条带不会是RNA吧。
呃?RNA不是一条带的吧,它不会降解的么?你们快抽使用的什么方法呢?可以确定跑出来的是什么东西吗?
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5楼
2013-01-17 09:04:36
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能确定快抽时的条带是目的质粒吗?快抽时看到的亮的条带不会是RNA吧。
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3楼
2013-01-17 08:53:00
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piaoyunokok
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3楼
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cicelyzh
at 2013-01-17 08:53:00
能确定快抽时的条带是目的质粒吗?快抽时看到的亮的条带不会是RNA吧。
呃?可是只有一条带的啊,RNA不止一条带的,而且RNA很容易降解的,提取基因组时也是最下面一团的,这个真的是一条亮带的哦。。。。你们快抽时使用的什么方法呢?可以确定跑出来的是什么东西么?
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4楼
2013-01-17 09:03:14
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cicelyzh
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piaoyunokok: 金币+1, 谢谢
2013-01-18 10:07:39
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5楼
:
Originally posted by
piaoyunokok
at 2013-01-17 09:04:36
呃?RNA不是一条带的吧,它不会降解的么?你们快抽使用的什么方法呢?可以确定跑出来的是什么东西吗?...
我用的是酚:氯仿:异戊醇震荡。抽出来的东西什么都有的。电泳跑长一点可以分辨清楚。能看到基因组DNA、质粒和下面的几条RNA。RNA在新鲜裂解的样品中很亮的。因为不太喜欢用酚,现在我常用菌落PCR。
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6楼
2013-01-17 10:31:40
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