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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒快抽有条带，提取时却没有了，什么问题啊？
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

[交流] 质粒快抽有条带，提取时却没有了，什么问题啊？

如题，最近试验转化大肠杆菌E.Coli   DH5α，氨苄抗性，做质粒快抽时有条带，而且条带还很亮的，可是扩培（加入抗生素）后，却提不出质粒来，半点条带都没有，请教各位高手到底是什么原因？？？？？
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1楼2013-01-16 16:39:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
能确定快抽时的条带是目的质粒吗？快抽时看到的亮的条带不会是RNA吧。
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3楼2013-01-17 08:53:00
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-17 08:53:00
能确定快抽时的条带是目的质粒吗？快抽时看到的亮的条带不会是RNA吧。

呃？可是只有一条带的啊，RNA不止一条带的，而且RNA很容易降解的，提取基因组时也是最下面一团的，这个真的是一条亮带的哦。。。。你们快抽时使用的什么方法呢？可以确定跑出来的是什么东西么？
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4楼2013-01-17 09:03:14
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-17 08:53:00
能确定快抽时的条带是目的质粒吗？快抽时看到的亮的条带不会是RNA吧。

呃？RNA不是一条带的吧，它不会降解的么？你们快抽使用的什么方法呢？可以确定跑出来的是什么东西吗？
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5楼2013-01-17 09:04:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
piaoyunokok: 金币+1, 谢谢 2013-01-18 10:07:39
引用回帖:
5楼: Originally posted by piaoyunokok at 2013-01-17 09:04:36
呃？RNA不是一条带的吧，它不会降解的么？你们快抽使用的什么方法呢？可以确定跑出来的是什么东西吗？...

我用的是酚：氯仿：异戊醇震荡。抽出来的东西什么都有的。电泳跑长一点可以分辨清楚。能看到基因组DNA、质粒和下面的几条RNA。RNA在新鲜裂解的样品中很亮的。因为不太喜欢用酚，现在我常用菌落PCR。
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6楼2013-01-17 10:31:40
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