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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，跪求分析下PCR失败原因
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myfriendtl

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，跪求分析下PCR失败原因

跪求高手指点一下，为什么我的PCR产物电泳图这个样子。引物是通用引物27F和1492r
体系25ul，buffer：2.5，dntp：2，引物：0.5，模板0.5，taq酶天根的（5U）0.2ul
预变性94℃，4min
变性94℃，40s
退火56℃，1min
延伸72℃，1.5min
三十个循环
之后72℃，10min

Administrator 2013-01-09 15 小时 37 分钟.jpg
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1楼2013-01-16 15:09:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by myfriendtl at 2013-01-16 16:23:46
细菌的总DNA，用天根的试剂盒提取的。取得0.5uL。条带是16s扩增的...

提的总DNA一般浓度比较高，细菌PCR的模板一般加几ng就可以了，如果不能定量，最好做一下稀释梯度。
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8楼2013-01-17 08:37:42
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reninhat

铁杆木虫 (正式写手)
没有荧光扩增图么？光看电泳图不好分析啊
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2楼2013-01-16 15:14:45
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121however

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-16 20:28:12
amisking: 回帖置顶 2013-01-16 20:28:14
看你的marker应该是胶的问题吧，重新做个胶试试，加上eb后一定要混匀。另外退火时间是不是有点长啊
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3楼2013-01-16 15:22:06
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myfriendtl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by reninhat at 2013-01-16 15:14:45
没有荧光扩增图么？光看电泳图不好分析啊

没有啊，pcr这东西我也是刚做，结果各种问题
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4楼2013-01-16 15:22:07
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