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琉月2012

铁虫 (初入文坛)

[求助] 碱溶提取的蛋白质沉淀不下来呢

采用超声辅助碱溶酸沉法提取蛋白质,为什么酸沉时就是沉淀得不多呢????整个呈现混浊状态,就是离心后还是混浊的,沉淀下来的很少,请高手指点一下啊,就是调节pH在等电点附近,还是不行啊
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sunnymen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

树树8013: 应助指数+1, 谢谢阳光先生的应助 2013-03-27 21:26:34
这个很多可能性,一个就是你提取液中蛋白含量。可以先测定一下每ml提取中有多少蛋白,如果含量低,沉淀当然少。在就是你选择的pH是否是最适宜沉淀的pH。一般人都会跟你说等电点,但是提取液中是混合物,很多种蛋白,这时候谈等电点没什么意义。跟上面几楼说的一样,可以做一个梯度pH实验,找到最适宜pH。还有一些蛋白不适宜酸沉淀,你可以换硫酸铵或TCA沉淀
6楼2013-03-26 22:37:23
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chenkyn

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2013-03-23 10:14:02
分组做,慢慢调PH,自己摸索出最佳PH点。
2楼2013-01-17 11:59:15
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294041918

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2013-04-02 16:52:12
试试用酶法除蛋白,蛋白酶酶解效果很好。
3楼2013-02-25 09:25:35
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qww1234

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2013-04-02 16:52:17
做pH梯度,看看那个梯度下的自然沉淀最多,等电点时我记得很容易看到大片的絮状物
4楼2013-03-23 01:06:58
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