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dfl204铁杆木虫 (著名写手)
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BAC克隆相关问题请教
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1. 找别的课题组拿了一个BAC的质粒DNA，氯霉素抗性，外源片段180kb左右。想转到大肠杆菌中扩繁，但是36小时才有克隆，菌落和质粒PCR均为阴性，一般这种情况正常长出克隆需要多长时间？如何提高转化效率？ Ps： 感受态细胞是商业化的，热激转化和电转化的都试过。 2. 如果在此BAC基础上想酶切后回收30-50kb左右的片段，如果没有脉冲电泳仪，有什么好的方法可以完成。有人建议蔗糖梯度离心，但是没有找到相应的纯化特定大小DNA的方法，纯化蛋白质的倒是有很多。 有哪位赐教相应的详细步骤？ 不甚感激！ |
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