24小时热门版块排行榜    

查看: 796  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wurihan1983

铜虫 (小有名气)

[求助] 帮我看看PCR后的电泳条带,是否应该重新设计引物

目的条带为一千个bp左右,但是出现的条带上面两个 非常模糊,下面特别亮的应该是非特异性的吧?下一步我应该怎么做呢?需要重新设计引物吗?
或者改变一下PCR体系?

我用的是宝生物的taq酶,50ul
10×buffer   5u
dNTP           4u
模板           2u
引物1         1u
引物2        1u
taq酶         0.25u
ddH2O       36.75u

PCR为   94度    预变性5mn
             94度    45s
             55度    30s
             72度    1min(共35个循环)
             72度     10min延伸

IMG_5143.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wurihan1983

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-13 01:47:40
最下面的是引物二聚体。引物的Tm值是多少?可以先尝试优化一下退火温度。marker用的是DL2000吗?上面的带也不是你要的吧。总之先用这对引物试试。做个退火温度梯度。
PCR的程序是可以的。你虽然给出了详细的反应体 ...

marker我用的是DL2000的。上面的带很接近我的目的条带。所以我做了脱货温度梯度和模板浓度梯度。效果挺好。我的模板是无乳链球菌基因组DNA。我之前用的是索莱宝taq酶的一套。后来改成takara的了。还是后者好用啊。呵呵、谢谢您的回答。因为我还是新手,不知道如何给您两个金币!是系统自动转给您吗?
3楼2013-01-17 23:41:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-01-13 20:05:45
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-13 20:05:49
最下面的是引物二聚体。引物的Tm值是多少?可以先尝试优化一下退火温度。marker用的是DL2000吗?上面的带也不是你要的吧。总之先用这对引物试试。做个退火温度梯度。
PCR的程序是可以的。你虽然给出了详细的反应体系,但没有各种组分的浓度,没办法确定用量是否合适。模板是什么?是否大致确定用量是多少?
此外,在试条件的时候PCR没必要做50μl体系,做20或者25μl就完全可以了。
2楼2013-01-13 01:47:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZOEY21

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

最上面带在750吧,个人感觉引物、酶量大了
4楼2013-01-18 09:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见