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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物条带很弱，怎么能改善下
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公子_小白

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr产物条带很弱，怎么能改善下

我做的是不同地理种群岩虫的COI基因多样性。引物已经设计好了，现在出现一个问题，就是我在跑兴城群体的时候条带很清晰，而且拿去测序的结果也回来了，也很好，但是我用相同的体系跑广西的群体时，就出现条带非常弱的现象，我试着加大了模板量（从1微加到2微），但是结果还是一样，我不清楚这是为什么，求高手帮忙，不胜感激~~~~~~
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1楼 2013-01-08 16:38:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

淘气肥猫

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
浓缩就是重新对你的样品用2倍体积乙醇沉淀，去掉上清，用更小体积的水溶解DNA
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10楼2013-01-09 23:42:53
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普通回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你增加几个循环看看
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shine
2楼2013-01-08 16:45:57
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的体系都重新优化一下吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-01-08 18:05:03
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lxbxk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果模板浓度很低的话，1微和2微本身就没啥区别，可以将其浓缩一下，再做，也可以试试增加酶和循环数
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做开心的自己，加油
4楼2013-01-08 18:15:26
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公子_小白

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxbxk at 2013-01-08 18:15:26
如果模板浓度很低的话，1微和2微本身就没啥区别，可以将其浓缩一下，再做，也可以试试增加酶和循环数

怎么样浓缩啊
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5楼2013-01-09 12:48:37
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小小技术官

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物会不会反复冻融了呢 这个很受影响的
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生活是一面镜子，要笑着面对！
6楼2013-01-09 13:14:59
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anfanlinli

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你跑兴城群体的时候pcr产物假如很好，而另一个不行，可以看看是不是引物结合区有SNP位点，可以用 blast比对一下看看，假如是有SNP可以加一条简并引物。
不想那么麻烦就增加循环数用磁珠法富集PCR产物。当然你先保证你另一个群体的样本DNA浓度是够的，别是因为DNA没有提好白忙活一场。
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7楼2013-01-09 14:00:37
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hylee103

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以增加一下延伸时间。
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8楼2013-01-09 15:04:27
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warage

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道LZ跑多少循环的，前段时间我也遇到这个问题，可以适当增加几个循环，我是增加了5个循环，效果很明显。
还有就是你的DNA应该是组织抽提吧，浓度怎么样
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9楼2013-01-09 16:15:56
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