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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 分离DNA和蛋白质
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galphen

新虫 (初入文坛)

[求助] 分离DNA和蛋白质

请问：
       有没有一种比较理想的方法，分离大约6kD的DNA和23kD的DNA与蛋白质的复合物，并且我的体系量比较小，只有200pmol左右，我自己尝试过超滤的方法，但是不是很理想，请有过类似经验的同学给点建议，非常感谢。
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1楼2013-01-07 16:40:00
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回帖置顶 ( 共有1个 )

hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-01-07 20:45:36
从理论上讲SDS-PAGE和Sephadex都可以，最早的基因与蛋白结合序列就是利用SDS-PAGE来鉴定的。Sephadex可定可以，选好型号就可以了，自己装柱子，仔细操作没问题。条件好的话氯化铯密度梯度离心也能分开
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4楼2013-01-07 18:03:42
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普通回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-05 11:53:29
你那边能不能做分子筛。
凝胶过滤层析，可能是可以的。
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galphen
静心做事。
2楼2013-01-07 17:06:49
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galphen

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiangyhai at 2013-01-07 17:06:49
你那边能不能做分子筛。
凝胶过滤层析，可能是可以的。

请问 那个是用Sephadex G-25 填料吗，需要自己装填料还是有商业装好的呢，谢谢啦。
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3楼2013-01-07 17:26:37
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by galphen at 2013-01-07 17:26:37
请问 那个是用Sephadex G-25 填料吗，需要自己装填料还是有商业装好的呢，谢谢啦。...

你是不是只要DNA与蛋白的复合物呀。我这边有superdex75，你在哪里？方便的话送到这边做吧。13401392680 江先生
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静心做事。
5楼2013-01-07 20:51:49
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
3M NaCl可以出去非特异结合。其他加酶，去除
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shine
6楼2013-01-08 16:25:23
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galphen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-08 16:25:23
3M NaCl可以出去非特异结合。其他加酶，去除

我尝试过加酶的方法，但是因为我的体系存在lysate，所以加入酶以后，目标的DNA蛋白质复合物就被降解了，不过还是谢谢……
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7楼2013-01-09 10:38:33
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galphen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiangyhai at 2013-01-07 20:51:49
你是不是只要DNA与蛋白的复合物呀。我这边有superdex75，你在哪里？方便的话送到这边做吧。13401392680 江先生...

我是北京的 你哪里的……
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8楼2013-01-09 10:39:00
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by galphen at 2013-01-09 10:39:00
我是北京的 你哪里的……...

江苏
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静心做事。
9楼2013-01-09 12:27:02
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KW

木虫 (著名写手)
楼主我也做相同的分离，可以交流啊。我的QQ：360030537
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10楼2013-06-05 10:43:01
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