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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我的蛋白在大肠杆菌中表达量低怎么办？
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ruililian09

银虫 (小有名气)

[求助] 我的蛋白在大肠杆菌中表达量低怎么办？

我的目的基因约1000bp，用PET-28a载体连接后转化到大肠杆菌BL21中表达。第一次在37℃表达，用0.1~1mMIPTG诱导结果还不错，蛋白基本都在上清中，但表达量也不是很高（见附件中的图）。但是后来又做了几次表达，一样的条件但就是做不出原来的表达量了，不知道是为什么，请各位帮帮忙。我现在在重新提质粒转化，不知道有没有用。要是不行的话，是不是要考虑换载体或者宿主菌什么的？
2012-12-26 37℃诱导5小时.scn(2.77MB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DXbXYx-pUAQA57b?p=130497
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1楼2013-01-06 14:54:28
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sdgxz

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ruililian09: 金币+1, ★有帮助 2013-01-08 12:33:31
或者可以尝试一下自诱导
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3楼2013-01-07 08:47:19
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ruililian09: 金币+1, ★有帮助 2013-01-08 12:33:24
（1）每次重新转质粒
（2）用PlyS细胞为宿主菌
（3）37度培养至OD0.6后，然后降温到18度，过夜表达

不行，做融合蛋白，这样提高表达量和溶解性。
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-01-06 17:16:17
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ruililian09

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-01-06 17:16:17
（1）每次重新转质粒
（2）用PlyS细胞为宿主菌
（3）37度培养至OD0.6后，然后降温到18度，过夜表达

不行，做融合蛋白，这样提高表达量和溶解性。

18度培养不是为了减少包涵体吗，也能提高表达量吗？现在我的蛋白基本都在上清里面，只是总表达量上不去。
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4楼2013-01-07 21:41:42
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ruililian09

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-01-06 17:16:17
（1）每次重新转质粒
（2）用PlyS细胞为宿主菌
（3）37度培养至OD0.6后，然后降温到18度，过夜表达

不行，做融合蛋白，这样提高表达量和溶解性。

我前两天重新用质粒转化，再表达了，电泳结果比前两次的好多了，能看出和阴性条带的区别了，但还是没有第一次的结果好。所以我想表达量和BL21的感受态有没有关系，我的感受态好像没有以前好了，质粒转化的阳性菌落也不多，不知道重新做感受态再转化表达会不会得到以前的结果。
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5楼2013-01-07 21:44:16
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