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矛盾聚合体

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 97.5
帖子: 12
在线: 9.2小时
虫号: 1929306
注册: 2012-08-08
性别: GG
专业: 中西医结合临床基础

[求助] 已知基因序列，要用PCR克隆该基因，模板从哪里来？

　假设我已经得到基因序列了，我也知道下一步要PCR，设计引物什么的，但是我就是不知道模板从哪里来（我手上没有现成的）。。。是直接捣碎一个人的细胞提取全DNA吗？这样的话，模板未免也太多太杂了吧，得浪费多少核苷酸啊。。。
　我的想法是，把DNA提取出来以后用限制酶切了，然后电泳，比如目的基因是500bp的，那我就选500bp的区段电泳出来的DNA片段作PCR。。。可是，即便是这样，也还是含有很多很多的片段啊，而且限制酶切出来的位点正好在我要的基因上怎末办？小弟只是处在理论阶段的大一生，从来没有动手操作过，提取的想法未免幼稚，请各位见谅

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1楼2013-01-06 10:45:16

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caitlin0626

新虫 (正式写手)

应助: 35 (小学生)
金币: 1390.9
红花: 2
帖子: 420
在线: 53.1小时
虫号: 2119710
注册: 2012-11-11
专业: 细胞、亚细胞结构与功能

要么向其它研究者要，要么委托外面的公司合成该序列，一般成本还是很低的，现在合成1bp大概才1.5RMB，倒是很简便的方法。之后再设计引物啊，酶啊什么的克隆出来。

14楼2014-05-20 21:48:24

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