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805085868

铁虫 (小有名气)

[求助] 请教大家有关找靶点的一个问题，谢谢你们了~~~

我想问一个问题：我现在想找调控因子的靶基因，我可不可以先通过RT-PCR初步看一下哪些基因在敲除该调控基因之后没有转录，然后通过凝胶阻滞实验来验证一下。这种方法可行吗？希望有这方面经验的朋友们帮忙解答一下。我现在是不知道怎么找到该基因可能的靶点有哪些，也不知道用什么软件预测。谢谢你们了~~~
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俺只是个小硕
1楼 2013-01-04 20:13:53
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805085868

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ccharlien at 2013-01-04 20:28:04
既然有了突变体，就可以做基因芯片分析转录的变化，然后再选择有希望的基因进一步筛选
如果已知它作用于某一通路的话，也可以用一些商业化的针对不同通路的QPCR预混试剂（PCR-array）筛选
至于之后做EMSA还是做报 ...

我做的是一个有关抗生素合成的一个调控基因，我刚才说的只是做个RT-PCR可行吗？我就想初步的筛一下，我们实验室做芯片技术还不成熟，实在想不出什么方法了
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俺只是个小硕
3楼2013-01-04 21:03:31
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
805085868: 金币+2, ★有帮助 2013-01-04 21:03:57
既然有了突变体，就可以做基因芯片分析转录的变化，然后再选择有希望的基因进一步筛选
如果已知它作用于某一通路的话，也可以用一些商业化的针对不同通路的QPCR预混试剂（PCR-array）筛选
至于之后做EMSA还是做报告基因，ChIP什么的都是可以考虑的
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2楼2013-01-04 20:28:04
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
805085868: 金币+4, ★有帮助 2013-01-04 21:56:30
引用回帖:
3楼: Originally posted by 805085868 at 2013-01-04 21:03:31
我做的是一个有关抗生素合成的一个调控基因，我刚才说的只是做个RT-PCR可行吗？我就想初步的筛一下，我们实验室做芯片技术还不成熟，实在想不出什么方法了...

只要你知道去做什么基因当然可以啊，就是个通量的不同而已
自己做定量PCR可能一次筛个十几二十个也能发现东西
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4楼2013-01-04 21:23:10
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