应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET31b双酶切为何只有一条带呀？？？
52/1返回列表
查看: 2578  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] pET31b双酶切为何只有一条带呀？？？

各位大侠好，最近我用pET31b空质粒做Nde1和Xho1双酶切，两酶之间大约有380 bp，但为何双酶切后看不到380 bp的条带呢？？两种酶没有问题，已经验证过单酶切都能切开，双酶切也能切开，大小是对的，但就是没有切下来的小片段，这是为何呀？？？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-12-29 22:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
cdmmore: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢，学习了 2012-12-30 16:49:48
引用回帖:
9楼: Originally posted by cdmmore at 2012-12-30 13:12:13
上样量20 ul还是看不到。
另外，请教一下为什么电泳时间长EB浓度变小呢？EB是加在胶里面的...

EB也是带电荷的，会从正极向负极移动。所以随着电泳，胶下面部分的EB会变少。
赞一下 回复此楼
11楼2012-12-30 16:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

ccharlien

木虫 (正式写手)
你已经验证了双酶切大小是对的（小了380bp）但是看不到380bp的条带？
我猜测可能质粒浓度低片段小有可能胶成像系统的自动设置看不出来或者酶切时间太长了
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-29 22:44:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢，学习了 2012-12-30 13:07:47
其实应该是你没看见，条带亮度都是和质量成正比的，你切下来的380bp片度与你的质粒摩尔量是一样的，那么你能期待它有多亮啊（估计只有你质粒亮度的十几分之一）？我觉得仔细看还是有的，不过用成像系统估计是看不见的。做分子的眼睛都是练出来的，特别是一些先双酶切再胶回收的，经常看不清！
赞一下(1人) 回复此楼
悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
3楼2012-12-30 02:13:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2012-12-30 13:09:30
缩短电泳时间，加大上样量应该可以看到吧。分子量小的片段亮度本身就比载体暗很多，电泳时间长一点后下面胶的EB浓度变小，更加不容易看清。
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-30 02:21:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭