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路程

新虫 (初入文坛)

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[求助] 目的片段丢了一截

求指教，最近做TA克隆，目的基因和T载体连好后转化，挑单克隆提质粒，可是目的基因丢了好大一段，变小了，有虫友遇到相同问题吗，怎么解决的呢？

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1楼2012-12-27 17:10:29

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路程

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by Lester11 at 2012-12-27 19:29:22
这个问题我们实验室的一位师兄遇到过，挺麻烦的。
你看一看你的目的基因是不是有部分GC含量很高，这样的话PCR可能就跳过了那一部分，P出来的基因少一片断。
遇到这种情况你要换一种更有效的针对高GC的内切酶。
试 ...

感谢回复，目的片段TA克隆之前跑电泳条带正常，转化完提出质粒就少了一大截，应该不是pcr的问题