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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] PCR不出目的条带的原因

各位虫友们,小女子有问题想请教,望大家给出宝贵意见。
为什么PCR同一个基因,同一个模板,换了引物,但每次p出来的条带都在500左右的样子啊?目的条带是2000时,p出来的是500,目的条带是1500时,p出来也还是500,我们排除了引物、模板、酶、buffer等原因,退火温度也尽量低,但为什么还是得不到目的条带呢?
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喜欢生物,所以想好好研究下去!
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virus2009

金虫 (正式写手)

人称 龙哥

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
退火温度不是越低越好的,你可以考虑摸索一下退火温度,引物单上的Tm降5度,然后上下浮动2-3度进行摸索。找到合适的Tm。
virus
9楼2012-12-27 09:59:48
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jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看一下延伸时间是不是改变了。这种情况我认为是引物的问题应该是引物没有设计好,易形成二聚体或者发卡结构引起的
2楼2012-12-26 18:37:27
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果美女排除了引物、模板、酶、buffer等原因,那么除了水,只有可能是你的引物设计上问题了。建议重新设一对引物扩扩看,同时那一对已知可用的引物扩一下做阳性对照,祝美女实验顺利!
3楼2012-12-26 18:40:17
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liudianlei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物设计的有问题
4楼2012-12-26 19:09:32
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