应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因片段连接到载体中，偶很困难！！！！
51/1返回列表
查看: 1416  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yeyu541200

新虫 (小有名气)

[求助] 基因片段连接到载体中，偶很困难！！！！

我有一个荧光片段GFP，需要和另一个片段融合后，连接到Pcdna3.1载体中，我已经将GFP和我的目的片段融合了，就是将目地片段连接到PEGFP载体上。可是GFP+目的片段就是连不到3.1中去，换了酶切位点也不行，转化的时候要么不长，要么长一片，Amp换了又换，快把实验楼的其他实验室的Amp用过来了，浓度也是在变，哎    愁死我了，构建这个载体都一个月了，还没成功！请有经验的大侠帮帮忙！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-21 10:03:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeyu541200

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-22 07:41:02
1400bp不难的。有一次连4K的片段，弄了一个多月才出来的。
保证酶切完全。有的酶可能会切过，注意时间和用量。如果是单酶切的话把载体去5'P。祝实验顺利。...

哎     昨天做了一遍又，连着两天 ，长得满满的，Amp浓度提高了2倍还是一样。愁死我了   现在都不知道哪家的Amp好使了。
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-22 09:13:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yeyu541200: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2012-12-21 17:53:49
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2012-12-22 07:52:55
转化的时候什么都不长至少是说那批板子上的Amp是有效的吧。
你的GFP+目的片段合起来很大吗？有时候大片段的连接和转化不是很容易的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-21 13:17:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeyu541200

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-21 13:17:39
转化的时候什么都不长至少是说那批板子上的Amp是有效的吧。
你的GFP+目的片段合起来很大吗？有时候大片段的连接和转化不是很容易的。

我的片段一共加起来才1400，很难么这样？
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-21 17:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keennes

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2012-12-22 07:52:20
yeyu541200: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-22 08:58:43
注意载体要酶切彻底，回收后定量；GFP+目的片段酶切后也定量；保证插入位点正确；酶连体系比例，插入片段摩尔数：载体摩尔数=5-10。祝顺利。
赞一下 回复此楼
独上高楼，望尽天涯路……
4楼2012-12-22 00:48:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +4 Tide man 2026-08-11 4/200 2026-08-12 00:39 by liuqidi
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭