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清风寨

银虫 (小有名气)

[求助] 将两个基因串联到启动子下面,两个基因都能表达么?

想请问各位大侠,如果我将两个基因GFP、neo基因串联到A3启动子下游,两个基因都是完整的阅读框,中间用内切酶Not I酶切连接。下游再加上加尾信号和反向重复序列。这样子GFP和neo两个基因都能表达么?
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冷风过心变热
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

目前一种常用的方法是利用荧光来侦测已经接受DNA的细胞。通常将欲表达的基因克隆到含有绿色荧光蛋白的基因的载体上,接受此载体而且表达出绿色荧光蛋白的基因的细胞,在荧光显微镜下呈绿色。若欲表达的基因与绿色荧光蛋白的基因融合,而且由同一个启动子进行转录,制造出的mRNA会含有两个基因的序列,当翻译第一个基因而碰到终止密码子时,核糖体会从mRNA上掉下来,造成第二个基因无法表达。解决这个问题的方法是,在两个基因间加入一个内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列,让第二个基因可由内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列处进行翻译,如此两个基因就可以同时被翻译,制造出不同的蛋白质。
49楼2013-07-06 22:47:27
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hf2016

金虫 (正式写手)

理论上是中间没有终止子可以融合表达
一切开始于结束之后
2楼2012-12-20 08:53:54
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zhoufeng1982

木虫 (著名写手)

知道了啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊
3楼2012-12-20 08:57:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
清风寨: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-12-20 09:15:03
如果中间没有终止子的话是可以的。有终止密码子的话,两个基因可以串联表达。没有去掉了第一个基因的终止密码子的话形成融合蛋白。
4楼2012-12-20 09:10:02
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